运行梯度表
按operate methods键，进入梯度方法运行窗口
将光标移至table处，输入欲运行的表号(1-15)
按显示屏对应功能键start run，运行
c. 实验结束
对泵进行冲洗后，关闭流量，注意流速必须要逐步变化。
*冲洗顺序
如果使用有缓冲液的流动相，则停泵前一定要用HPLC级纯水清洗HPLC系统。
同时用清水清洗柱塞杆。
若停泵存放时间超过一天，则停泵前还需用水/甲醇清洗系统。
*关闭电源开关。
2. 2487检测器的操作步骤
a. 开机
检查2487的电路，流路已正确连接
如较长时间未用, 开机前用HPLC级甲醇(已经过滤和脱气)用1ml/min 流速冲洗至少15分钟
接通电源开关
LCD面板显示一系列自检过程，约7分钟
通过自检后显示吸光度主屏幕
b. 单/双波长方式的设定
当2487在Stand alone模式下运行时，可通过面板键盘选择其单/双波长检测方式
2487的预设方式是单波长方式,在主屏幕下,按λ／λλ(Shift +Autozero)键可在 单/双波长方式间切换,并被检测器记忆存储,下次开机时,2487会显示上次关机时的设置,主屏幕右侧会出现一个λ或λλ标记,分别表示检测器已处在单或双波长方式下
在主屏幕下可用A/B键切换通道,分别观看A或B通道的吸光度检测值，并可分别键入波长和灵敏度数值,以及其它参数
c. 关灯
为节省灯的使用寿命,可在2487不关机的情况下,只把灯关闭 (Waters 建议:只是在关灯时间超过4小时以上时才需要实施关灯操作,因为频繁开关灯,同样会有损灯的寿命)
按Lamp(Shift,1)键,出现一个灯控制屏幕
再按一次Lamp(Shift,1)键,即将灯关闭,显示屏上会出现灯关闭的信息和图示
d. 关机
关机前需保证流动池内无缓冲盐，用100%水冲洗，以洗去缓冲盐
再用90:10的甲醇/水，冲洗系统，并将系统保存在该流动相中
将面板右下角的电源开关扳到off, 即将2487检测器关闭。
六、注意事项
1．柱的使用和维护注意事项
①避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
④选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。
⑤避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。
⑥经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
⑦保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
⑧每次工作完后，最好用洗脱能力强的洗脱液冲洗。装在HPLC仪上柱子如不经常使用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟。
2．泵的使用和维护注意事项
为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照下列注意事项进行操作：
① 防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、
缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。
② 流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停
泵过夜或更长时间的情况下。
③ 泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。
④ 输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。
⑤ 流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵就无法正常工作。
七、思考题
1． 色谱分析的基本原理是什么？
2． 何谓流动相，固定相？
3． 任何样品都能用液相色谱法分析吗？
