三、原 理
色谱法的分离原理是：溶于流动相（mobile phase）中的各组分经过流动相时，由于与固定相（stationary phase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在流动相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
四、使用范围
高效液相色谱法适用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定易分解的、分子量大、不同极性的有机化合物；生物活性物质和多种天然产物；合成的和天然的高分子化合物等。它们涉及石油化工产品、食品、合成药物、生物化工产品及环境污染物等，约占全部有机化合物的80%。其余20%的有机化合物，包括永久性气体，易挥发低沸点及中等分子量的化合物，只能用气相色谱法进行分析。
五、 操作步骤
1． 600泵的操作步骤：
a. 600泵的启动
600泵接通电源后，首先运行自检程序，通过自检后，显示初始屏幕。初始屏幕显示：型号，版本号等，并显示下一步操作的提示键。
*开机顺序
检查600泵的电路，流路和氦气已按要求正确连接。
确认氦气减压表在50－90psi间。
接通电源。
通过自检后，氦气脱气操作。
按setup键，进入设置窗口
移动光标至流动相脱气区（瓶号：ABCD）
按1键和enter键，打开相应流动相瓶号的氦气开关
在此窗口中还可设置温度和压力上下限范围
移动光标至相应操作区，用数字键输入数值，按回车键确认
按direct键，进入isocratic窗口
移动光标至氦气流速sparge区
按数字键输入数值,并以enter键确认。
刚开始时通常以100ml/min, 脱气15 分钟。平衡后，可根据流动相的不同而降低氦气流速。
*抽液操作
移动光标键至组分区new composition
在A下方，键入100，enter键
其他组分（BCD）下方键入0，enter键
将抽液阀inlet manifold valve旋至draw位
用针筒抽A液10ml，将抽液阀旋至run位
重复以上操作分别抽取B，C，D液10ml。
*冲洗操作
移动光标键至组分区new composition
在A下方，键入100，enter键
其他组分（BCD）下方键入0，enter键
旋开参比阀reference valve
移动光标键至流速区flow rate
设置流速为10ml/min: 键入10，enter键
将抽液阀旋至draw位用针筒抽液10ml
将抽液阀旋至inject位，并推出针筒中的液体
将抽液阀旋至run位。此时参比阀排出的液体应连续，如不连续则重复以上抽液排液操作。
将流速减小至0.2ml/min
将参比阀关闭。
b. 600泵的实验操作
*等度实验
按direct键，进入isocratic菜单。
依次设定流路配比，氦气流速，柱温。
设定方法如下：
按光标移动键，至闪烁光标出现在所需设定位置上。
用数字键设定数值，按enter键确认。
设定流速为0.1ml/min,设定方法同前
逐渐增加流速至实验所需的流量。
待系统平衡后开始实验。
*梯度实验
设定梯度表
按program method键，进入梯度编辑窗口。
移动光标键至table #处，输入数字键(1-15)，按enter键
将光标移至梯度表第一行，依次输入流速和流量配比，分别按enter键确认
光标移至第二行，依次输入梯度时间，流速，配比及曲线号(1-11)
重复以上操作，至梯度表全部编完
按显示屏对应功能键save，并记住table #
设定事件表(option)
按program table键，进入编辑菜单
移动光标键至table #处，输入数字键(1-15)，按enter键
将光标移至事件表第一行，依次输入事件号(1-10)和开关，按enter键确认
光标移至第二行，依次输入事件时间，事件号，和开关，按enter键确认
重复以上过程至事件表完成
按save键储存。
