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蛋白质核酸自动分析仪操作说明与注意事项
作者:佚名 来源:郑州牧业工程高等专科学校 时间:2008-1-29

    操作说明:
    准备:开始测定前只需开启仪器背后的电源开关即可开始测定,无需预热。

    一、核酸浓度测定(包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo)
    1. 例如待测定样品为dsDNA(eg:PCR产物),按下键“7 / dsDNA”
    (若待测样品为ssDNA,eg:反转录合成的第一链cDNA产物,则相应按下键“8 / ssDNA”;
    若待测样品为RNA,则按下键“9 / RNA”;
    若待测样品为Oligo(寡聚核苷酸),eg:PCR引物,则相应按下键“6 / Oligo”。)
    2. 将空白对照置入样品孔。注意:空白对照是空白液,并非所有情况都是水。(例如用Tris溶液溶解DNA制品,则要用Tris液做空白对照。)
    3. 按下键“Blank”;
    4. 仪器记录空白对照,设置为0.000A;
    5. 将第一个样品置入样品孔;
    6. 按下“Sample”;
    7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值,以及其他相关参考比值;
    8. 直接放入第二个样品;
    9. 按下“Sample”;
    10. 仪器显示第二个样品的吸光度值和浓度值,以及其他相关参考比值;
    11. 依次测定,每个样品的测定值将自动存储在机器中,查看测定结果的方法如下:
    (1)按下键“./ Function”
    (2)选择“DISPLAY-RESULT”,按Enter键,查看每个样品的测定值记录(本机可存储100个样品的测定值)。
    设定样品的稀释度
    (1)按下键“Dilution”;
    (2)输入样品体积和稀释液体积,按Enter键确认。

    二、蛋白质浓度的直接测定(280nm测定)
    1. 按下键“4 / Protein”;
    2. 将空白对照置入样品孔;
    3. 按下键“Blank”;
    4. 仪器记录空白对照,设置为0.000A;
    5. 将第一个样品置入样品孔;
    6. 按下“Sample”;
    7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值,以及其他相关参考比值;
    8. 依次测定,每个样品的测定值将自动存储在机器中,可查看测定结果。

    三、蛋白质浓度显色法的间接测定(Bradford,Lowry, BCA)
    1. 按下键“1 / Bradbord”or “2 / Lowry”or“BCA”选择蛋白质显色反应的方法;
    注:Bradford键按两次,每次显示不同的测定范围。
    2. 设置标准曲线的标准样品数量、测定次数和浓度范围。按下键“Parameter”用上下键 进行选择和参数调整。
    3. 将空白对照置入样品孔;
    4. 按下键“Blank”;
    5. 仪器记录空白对照,设置为0.000A;
    6. 将第一个标准品或样品(如需沿用已存储的标准曲线,可直接测样品)置入样品孔;
    7. 按下“Sample”或“Standard”;
    8. 依次测定标准品或样品,每个样品的测定值将自动存储在机器中,查看测定结果。

    四、OD600 细菌生长密度测定
    1. 按下键“5 /OD 600”;
    2. 将空白对照置入样品孔;
    3. 按下键“Blank”;
    4. 仪器记录空白对照,设置为0.000A;
    5. 将第一个样品置入样品孔;
    6. 按下“Sample”;
    7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值;
    8. 依次测定,每个样品的测定值将自动存储在机器中,查看测定结果。

    注意事项:
    1 为了尽量减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内颗粒的干扰相对较小,结果稳定。样品的浓度不能过低或者过高。
    2 混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值;
    3 混合液中不能有气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;
    4 必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则测定浓度结果差异太大;
    5 换算系数和样品浓度单位选择要一致;
    6 不能采用窗口磨损的比色杯;
    7 样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积(50ul);
    8 通常浓度的样品可以用10 mm光程长度进行检测。对于高浓度的样品,只需将比色皿旋转90°,使用稍短的2 mm光径进行检测。

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