生物秀首页 新闻前沿 产业资讯 实验技术 仪器教程 生物考研 资源下载 生物人 物秀商城 生物论坛 图片 专业 博客 易生物 视频动画
实验仪器选购、使用与维护平台
导航: 生物秀 > 仪器 > 其它设备 > 正文
  • 倾力提供最优!
  • 生物秀仪器频道
PDS—1000\He型基因枪操作流程
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2008-1-21
    设备名称   台式基因枪系统                             
    型  号   PDS-1000/He Gene Gun System     
    国别厂家   美国BIO-RAD公司                                   
     
    功能范围
    通过在氦气高压下,将用钨颗粒包埋的转基因载体射入植物组织,用于植物转基因研究和阳性克隆的获得。 
    辅助设备
    氦气钢瓶、真空泵、稳压仪等。


    PDS—1000\He 型基因枪操作流程
    微弹的制备:
    1、EP管称取60 mg (或3mg)金粉;
    2、加入1ml (或50ul)无水乙醇,振荡1min,10000rpm离心10S;
    3、弃上清,加入1ml(或50ul) 无菌水洗,振荡1min,10000rpm离心10S;
    4、弃上清,加入1ml(或50ul) 无菌水洗,振荡1min, -20℃;
    DNA的包裹
    1、50ul金粉悬液于EP管;
    2、依次加入5ul/3ul质粒DNA(1ug/ul),50ul 2.5M CaCl2 和20ul 0.1M亚精胺(每加完一样可振荡3S),静置10min; 
    3、振荡3S,冰上10min,10000rpm离心10S,弃上清;
    4、80ul无水乙醇,震荡重悬,10000rpm离心10S,弃上清;
    5、10ul无水乙醇定容(重悬);
    6、每次用10ul点于微粒载膜中央,使其平铺,晾至完全干燥,待用;
    基因枪的操作
    1、打开真空泵和基因枪的电源开关;
    2、打开氦气瓶阀门,旋转氦气调节杆,使气压高于所选可裂膜压力200psi左右;
    3、旋下可裂膜挡盖,将可裂膜放在挡盖中央,将挡盖旋上,用专用板水平加固;
    4、把微粒发射装置移出轰击室,旋下盖子,放入阻挡网,把微粒载片安装在固定槽中(有微粒的一面朝下),旋上盖子,将发射装置放回轰击室;
    5、将样品盘放置在轰击室的适当位置,关上轰击室门;
    6、按VAC开关(上档)抽真空,当表上读数为所需值时,开关打到HOLD(下档),然后按住FIER开关,当达到适当压力可裂膜自动破裂,松开FIER开关;
    7、开关打到VENT(中间档),以释放轰击室内的真空;
    8、打开轰击室门,取出样品盘;
    9、取出微粒发射装置,卸下微粒载膜和阻挡网(阻挡网和微粒载膜放入70%的酒精浸泡);
    10、旋下可裂膜挡盖,清除可裂膜碎片;
    11、若PDS—1000\He 型基因枪不再使用,关掉氦气瓶的主阀,按住FIER开关,按住FIE开关,放掉气体加速管内的氦气压力,最后关掉一切电源;
     
生物秀仪器频道
    没有相关仪器
设为首页 | 加入收藏 | 关于我们 | 战略伙伴 | 友情链接 | 法律声明 | 广告服务 | 联系我们 | 网站地图
Copyright © 2003-2008 生物秀 (中国·生物秀科技) 版权所有 信产部备案:鲁ICP备05001831号
客服信箱:info@bbioo.com  客服电话:15800302289  客服QQ:254857951
www.bbioo.com All Rights Reserved.