5.1 喷雾
试剂溶液以气溶胶的形式均匀地喷洒在薄层上。电动的TLC喷雾器用最少的试剂溶液产生几近理想的气溶胶。
5.2 浸渍
使用适当的设备如色谱浸渍设备III（Chromotogram Immersion Device III）,TLC/HPTLC板浸渍具有重现的结果。通过设定垂直方向速度（进入，抽出）和规定停留时间，浸渍条件可被精确地标准化。
6．检测
6.1 定性分析（同一性试验）
在相同的状态下（相同类型的TLC/HPTLC板、相同的溶剂体系组成、相同的组份点样体积和其它TLC设备系统），样品成份的Rf值、颜色、与专用的或特殊基因衍生化试剂的反应和参考物或标准物在同一TLC/HPTLC板同时层析所得的结果相符时，未知物就可认为是存在而被鉴别出来。分析的结果可以采用照片，照片复制品，影像记录（如：CAMAG 薄层色谱数码成像系统）或TLC扫描仪方法记录下来。
当混合物物质被测试时，参考标准物中单个馏份的Rf值可能会与纯物质的Rf有所不同，但测试物理学馏份和标准化馏份的hRf值必须相符，其DhRf在 ± 3之内。
为增加测试物与参照物同一性的可信度，采用TLC扫描仪即时记录其紫外光和可见光图谱并进行比较。多波长测定将测试物和参照物的图谱情况和hRf值相关联供进一步鉴别。
6.2 定量分析
（仪器：CAMAG scanner-3；具体操作请参考操作手册或教学软件）
定量分析采用光密度扫描法来评价。用winCATS 软件控制薄层色谱扫描仪以及进行扫描结果的数据处理，计算出各成分的峰高和峰面积及其平均值和离散系数（CV）或置信窨（CI）。通过单水平或多水平校准计算出结果。最后以报告形式将所有扫描参数、原始数据及图象结果保存及打印。
扫描狭缝宽度根据被测成份斑点的大小来调整（1）点状点样得到TLC中各成份，扫描其全宽度；（2）条带状点样，通常可以扫描其色谱带同心部份的50 - 70%。
物质的扫描波长可以通过光谱扫描来决定。
TLC/HPTLC板空白部位的漫射反射光用光电倍增器（PM）来收集并定其值为10% （=0% 吸收）。扫描吸光物质时，其吸收随着物质的量而增加。 对于具有荧光或可转变成具荧光性衍生物的物质的测定。光源一般使用发射光谱在254 - 578 nm之间的高压汞蒸汽灯，在254，302，313，366，405，436，546和578nm处有特别高强度的谱线。吸收了选择性激发波长后TLC中各成份发射出的较长波长荧光由光倍增器记录下来，使用锐截止滤波器或窄带滤波器将会阻止TLC/HPTLC板反射的激发波长光到达光电倍增器。和吸附测定一样，荧光强度作为板上定位的函数作图得模拟曲线（荧光定位曲线）（图10）。TLC扫描仪的测定原理在有关的设备文献中有报导。
荧光测定比吸收测定优越在于如下几点：（1）检出极限低1 - 3个数量级；（2）在较宽的浓度范围内校准曲线呈线性；（3）选择性较高。
在测定极限以上所有的检测成份可被量化。在检出极限以上而在测定极限以下的检测成份会给出检出和测定极限的平均值（作为结果）。
