方法D的特点：薄层预稳定，放置滤纸使展开室饱和
溶剂量增加一倍
每个展开室只有一块TLC/HPTLC板
薄层面向滤纸(如图7)
图7：有溶剂， 滤纸和TLC/HPTLC板的双槽
展开室
方法D的程序：
将展开剂倒入至一个槽内，将与展开室相同型号的滤纸（如CAMAG序号022.5243）用规定量的溶剂湿润后贴在玻璃展开室正面，另一槽空着,TLC/HPTLC板薄层面向滤纸地置放在空槽中，除非产品专用方法另有规定，15分钟（标准时间）后，稳稳地倾斜使足够量的溶剂移至有TLC/HPTLC板的槽中（图8，只有用20x20和20x10cm的展开室才能这样做；若为10x10cm的展开室，溶剂需从外部用移液管或类似器材实现转移）。
图9：有溶剂，滤纸和经预稳定TLC/HPTLC板的双槽展开室，层析开始
4.4参数
4.4.1温度
薄层色谱分析一般在室温中进行。对这过程，温度在20 - 25ºC算不上是临界值。 在这过程，中无短期的温度波动才是更为重要（避免抽风）。展开室应放置在无直射阳光和不通风处。温度波动对层析结果不利，故将展开室放在靠近窗口或热源处是欠妥的。
4.4.2空气湿度
空气湿度极高或极低主要影响有非极性溶剂 体系的无机涂层。相对空气湿度高于70-80%会影响薄层钝化，使Rf值增加。样品点样后，TLC薄层可置放在适当的硫酸和水的混合物的上面不少于30分钟，调整至指定的相对湿度。有关这方面的更多资料可从HPTLC Vario系统的操作手册中获得。
另一方面，在样品点样前，TLC/HPTLC板可在105ºC再活化30分钟进行干燥。然后薄层必须用一块玻璃板保护起来，只有起点区露出以便于样品点样。
若空气太干燥，可在干燥器中将TLC/HPTLC薄层置于水的上方以达到所要求的状况。
确定合适的层析条件的有效方法（用规定的湿度，溶剂蒸汽或溶剂调整使薄层达到要求的状况）是使用HPTLC Vario体系。
控制相对湿度用的硫酸溶液下表：
|
相对湿度 |
所需硫酸浓度（V/V） |
|
硫酸（ml） + 水（ml） | |
|
32% |
68.0 100 |
5.层析后衍生作用
若层析板分离的物质肉眼看不见又不能被紫外光活化，需加试剂 方能显色或发射荧光者，则需使用适当的试剂浸渍或均匀喷洒于薄层板面上，直接观察或加热显色后观察。加热显色者须注意加热时间和温度，尤其含羧甲基纤维素钠的薄层板，加热温度过高或时间过长，容易引起板面的焦化，如用硫酸等显色剂更易造成板面的炭化而影响显色效果。有的成分加试剂后，如挥发油成分经香草醛硫酸显色，加热温度和时间长短不同或放置时间不同均可能使斑点的显色有所改变。
有的品种可熏以试剂或试液的蒸气（如碘蒸气、氨蒸气）显色。
