形态学正常的冻存复苏后卵母细胞的减数分裂纺锤体和染色体进行免疫荧光染色。正常的纺锤体由微管组成，呈桶状结构，着丝点微管连接染色体着丝点和纺锤体极，染色体有规律的排列在纺锤体的赤道面上，染色体形状致密，与纺锤体的轴心呈垂直排列。不正常的纺锤体的微管数量减少、纺锤体体积变小、或者纺锤体被破坏，甚至消失，同时染色体的排列变得松散。如图5.2显示的是一个冻存后卵母细胞正常的桶状纺锤体和致密染色体。图5.3则是一个冻存后体积缩小的卵母细胞纺锤体。除了组成纺锤体外，微管同时还均匀地散在分布于卵母细胞的细胞质中，呈星体状，每个星体有一个中心。但是，伴随着纺锤体的变化，细胞质微管也会受到破坏，甚至消失。图5.4是30个连续图像，从各个层面说明冻存后形态正常的未受精卵散在分布于细胞质中的微管结构。
六：结语
激光扫描共聚焦显微镜是近80年代以来发展起来的高科技医学图像分析仪器，与传统的荧光显微镜相比，分辨率有了进一步提高，最重要的是清晰度大为提高。激光扫描共聚焦显微镜的发明是对电子显微镜的一个补充，在生物学尤其是细胞生物学领域有着广阔的应用前景。当然，LSCM也存在一些不足，比如激光管有使用寿命的限制；检测过程中需要使用荧光染料，增加了检测成本；激光存在荧光漂白作用及细胞毒性，应在使用过程中加以关注。随着生命科学研究的深入，生物医学研究已进入后基因组时代，基因组学的研究从结构基因组学过渡到功能基因组学，对功能蛋白质组学的研究也不断深入，同时，纳米技术在不同学科、不同领域中得以迅猛发展，如果单纯依靠某种技术、某种仪器远远不能满足研究要求。/0!1 与电子显微镜、原子力显微镜、生物质谱、核磁共振等技术相结合，必将在纳米技术、大分子结构与功能等新兴研究方向上发挥重要作用。
参考文献：
（1） Wilson T, Tan JB. Three - dimensional image reconstruction in conventional and confocal microscopes[J ] . Bioimaging ,1993 ,1 :176～184
（2） Brakenhoff GJ ,van der Voort HTM,van Spronsen Ea ,et al. 3 -dimensional imaging of biological structures by high resolutionconfocal scanning laser microscopy[J ] . Scan Microsc. ,1988 ,2 :33～40
（3） Zimprich F ,Ashworth R ,Bolsover S. Real - time measurements of calcium dynamics in neurons developing in situ within ze2 brafish embryos[J ] . Pflugers Arch ,1998 ,436 :489～493.
（4） Wade MH. Fluorescence Quantification in living cells [ J ] .Biomed ,1992 ,87 :43～48.
（5） Diaspro A ,Annunziata S ,Raimondo M,et al. A single – pinhole confocal laser scanning microscope for 3 - D imaging of bio2 structures[J ] . IEEE Eng Med Biol. , 1999 ,18 :106～110.
（6） Brakenhoff GJ ,Blom P ,Barends P. Confocal scanning light mi2 croscopy with high aperture immersion lenses [J ] . J Microsc. ,1979 ,117 :219～232.
（7） Stelzer EHK,Lindek S ,Albrecht S ,et al. A new tool for the ob2 servation of embryos and other large specimens : confocal theta fluorescence microscopy[J ] . J Microsc. ,1995 ,179 :1～10.
（8） Davin MS. Confocal scanning optical microscopy and its appli2 cations for biological specimens[J ] . J Cell Science ,1989 ,94 :175～182.
（9） Yguerabide J .Lateral mobility in membranes as detected by flu2 orescence recovery after photobleaching[J ] . Biophys J . ,1982 ,39 :69～75.
（10） illiams DA . Quantitative intracellular calcium imaging with laser scanning confocal microscopy[J ] . Cell Calcium ,1990. 11 :589～597.
（11） Paddock SW．Ｐrinciple and practices of laser scanning confocal microscopy [J].Mol Biotechnol,2000,16(2)；127-149.
（12） 黄行许,鲍永耀.共焦镜同时检测胞内Ca2+PH的变化 [J].中华物理学杂志，1998,1.
（13） Haugland RP. Handbook of fluorsecent probes and research chemicals. SA:Molecular Probes Inc., 1996,6th edition.
（14） Rijkers GT, et al. Improved method for measuring intracellular Ca2+ with fluo-3. Cytometry, 1990, 11:923～928.
（15） 张川里,吴本阶.钙荧光探剂的研究及其在生命科学中的应用. [J].生理科学进展,1996,27卷,第1期.
（16） 陈荪红,郭强苏. 激光扫描共聚焦显微镜观察冻存对SHR卵母细胞的影响.中华国际医学会杂志,2002,2月,第2卷,第2期.
