前 言
质量标准和资格认证已经成为现代实验室的重要问题。
PCR是分子生物学领域的关键技术。不管是在基础研究还是临床诊断领域,PCR 的应用越来越广泛。然而,使用PCR仪器时,消耗品和试剂对最终结果的影响还不是很清楚。但是PCR仪器温度控制的影响是很明确的。市场上众多品牌和型号的PCR仪器,在技术上有很大的不同,我们认为必须建立一个好的质量控制程序。
很多年以前,CYCLERtest公司已经开始研究PCR相关温度测试和温度变化对于PCR最终实验结果的影响。1998年,MTAS服务作为评价和认证PCR仪器温度控制的方法已经进入了Benelux市场。2002年,这套系统在全世界面世。CYCLERtest公司以温度传导测试领域的世界领导者而自豪。
温度评价的目的不仅仅是要确认仪器的质量。大多数的实验室工程师关于PCR仪器都碰到过无法解释的问题的经历,那些问题与反应混合物的组成无关。就像对于一个特定的仪器经常有不确定的表现,研究者经常抱怨“我的反应一直正常,但这台仪器怎么就出问题了?”根据我们的经验,这完全是个案,而不是两台PCR仪器共有的问题。甚至同一个品牌,同一个型号,显示出不同的温度性能,而这对实验成功至关重要。
影响PCR仪器温度控制性能主要有四种因素:
1.PCR仪器之间的差别对实验结果的影响。如前所述,没有任何两台PCR仪器的温度控制是一模一样的。相对于预设的温度模块温度总是偏高或偏低,就是同一模块不同的孔之间,温度有时也会不一样,相差可能达几摄氏度之多。一些PCR仪温度控制性能的不足造成的后果是:当PCR仪的模块温度在升温时,温度过冲或不足,不能准确的达到预设的平台温度。
2.温度控制技术的差别对实验结果的影响。导致PCR仪囟瓤刂菩阅苡帕拥囊蛩兀紫仁俏露瓤刂萍际酢5鹘赑CR仪模块的温度,使其达到并保持在某一温度有很多方式。每一种方式都有优点和缺点。另外,这些技术被运用控制的水平对于温度控制的水准是很重要的,且有很大不同。大多数PCR仪器的温度控制性能是很差的。在单一或多传感器控制机制上的不同显而易见的引起了温度的不均一性。
3.仪器老化对实验结果的影响。虽然PCR仪没有任何的机械或可移动部件,但是那并不意味着它不会磨损。电子器件的性能会随着时间的延长而老化,并由于过度的使用而加速老化。Peltier器件的失效或磨损会引起模块的热斑或冷斑,通常PCR仪器不能识别这种由于机械磨损,模块延展和收缩效应引起的温控性能的不同。因此,为掌握这些情况,实时监测PCR仪的温度控制性能是重要的。出于同样的原因 ,PCR仪温控性能的失常通常是实验失败或毁坏循环反应的重要原因。
4.外部因素对实验结果的影响。不同PCR仪品牌与型号在温度控制性能上的不同直接影响了三种温度平台的温度的准确性和不均一性,因而影响了整个PCR反应的实验结果。另外,升温速度的不同,温度下降梯度的不均一性,温度过低,温度过冲,也是重要的因素。最差的情况,一个本该阳性的结果却可能得出阴性的结果。对于实时PCR,荧光信号输出和产量/溶解曲线,直接与温度控制有关系,而这些结果很可能是戏剧性的。
5.实验室认证。根据以上的论点,很多实验室已经不得不适应一些认证。和ISO、GMP、GLP标准一样,必须证明所有的实验室程序是按照标准程序所操作的。一些实验室只有当他们采用已经被他们的合作组织或专业委员会测试的或认可的程序时才可以称他们自己是合格的,。
DRIFTCON 系统简介
硬件
该系统由探针装置组成,那是一个这样的结构:在测量之前电热调节器被放在一个固定器里,并且作为一个孔放在模块里。Driftcon箱是一个硬件模块,处理收集的信号,之后,软件系统显示结果。测量可以每天一次,每周一次或每月一次。
driftcon 系统组成
driftcon 硬件模块 +连接电缆
目前可提供的探针装置如下表所示:(目前那还不能提供所有的探针装置)。
例:96V-16: 表示 16号温度传感器 ,适用于96*0.2ml 模块
384-15: 表示 15 号温度传感器,适用于384孔板
48V-12: 表示 12号温度传感器 ,适用于48*0.2ml 模块
组成:driftcon 硬件模块
探针固定箱
DRIFTCON SMART-card
DRIFTCON 软件
软件
在启动Driftcon 以后,一个弹出窗口显示机器在测量。
