22. 移去单染CD3，换上单染CD19-PE管。点击Acquisition Control窗口中的Restart。调节FL1-%FL2使PE+细胞在FL1/FL2散点图的左上象限。调节完毕，点击Acquisition Control窗口中的Pause。
23. 最后以CD3-FITC/CD19-PE双染样本上机，点击Acquisition Control窗口中的Restart，确定三群细胞工整垂直。当您已完成2色荧光之光谱重迭时，点击Acquisition Control窗口中的Pause、Abort。
24. 移去样本管，换上dH2O管，让仪器暂且处于Standby状态。关闭Compensation窗口。您已完成2色荧光之最适化。
3.4收集实验数据
决定储存细胞总数
25. 预设之「储存细胞总数」为10000。如需修改，从Acquire菜单中选择Acquisition & Storage，并在出现的窗口功，确认「Collection Criteria」从10000 of All，再点击OK。
