准备您的细胞样品
1.理想样品浓度调至1-10X105cells/ml？一般实验只需0.5ml的样品。
2.细胞样品务必放至BDFALCON352052试管中，否则无法上机。
3.上机前务必去除样品中之细胞团块，以防止管路堵塞？可使用附滤网BDFALCON试管(Cat.No.352235)或35-55mm的尼龙筛网。
4.供流式分析的样品是单细胞悬浮液，而且大部分样品都需经荧光染色。表面抗原荧光染色的方法大致有两种：直接免疫荧光、间接免疫荧光染色。
·直接免疫荧光染色
·Lysed-No-WashProcedure
·Lysed-And-WashProcedure,SimulTEST&HLA-B27
·PeripheralBloodMononuclearCellProcedure
·LeukemiaandLymphomaProcedure1
·LeukemiaandLymphomaProcedure2,B-cellClonalityAssay
·间接免疫荧光染色
·滴定抗体浓度
·常用试剂
二、开机、关机标准操作
2.1FACSCalibur开机
1.开启细胞仪电源。
2.开启其它周边配备电源，如打印机及MO机。
3.开启计算机。
4.确认鞘流液筒有八分满的FACSFlow，确实旋紧(鞘液筒容量为4L)。
5.将废液倒掉，并在废液筒中加入200ml家用漂白水(废液筒容量为4L)。
6.将减压阀方向调在加压（Pressurize）位置。
7.排除液流管路与过滤器中的气泡。
8.取下样品管，执行PRIME功能两次。
9.使用1mlPBS，HIGHRUN两分钟。
10.可开始分析样品。
2.2FACSCalibur关机
关机前必要动作：清洗进样管和外套管，防止进样管堵塞、或有染料残留。
1.将样品支持架左移，取2mlFACSClean（10%Bleach）上样品，让仪器的真空系统抽取约1ml的液体。
2.将样品支持架回正，按HIRUN，然后让FACSClean清洗管路10分钟。
3.按Standby，取下样品管，执行PRIME功能两次。
4.取2mldH2O，重复上述步骤1-3。
5.注意最后只留约1mldH2O在试管中。
6.按STANDBY五分钟，使风扇冷却雷射后，关闭细胞仪（必要动作，以保护雷射光源。）
7.倒掉废液，并回填200ml漂白水。
8.将减压阀放在「VENT漏气」位置。将鞘流液筒充填至八分满。
9.退出软件“File”à“Quit”(如有对话选项，选择“Don‘tsave”)。确认退出计算机中所有BD应用软件，所有数据数据已储存备份。
10.关闭计算机。“Special”à“Shutdown”。
三、上机分析流程
建议首次试机避免进行大量试验，仅需准备下列样品。
（1）NegativeControl（不加任何抗体）。
（2）CD3-FITC（FL1单染）。
（3）CD19-PE（FL2单染）。
（4）CD3-FITC/CD19-PE（FL1/FL2双染）。
3.1Calibur开机
1.先开启细胞仪本体再打开计算机。*秘技1：如顺序相反，仪器和计算机之间无法建立正常通讯，无法执行“connecttocytometer”。解决之道，两者都关机、然后以正确方式重开。
2.向前拉开储液箱抽屉，检查鞘液筒、废液筒水量，如需充填鞘液，将减压阀方向调在VENT位置（箭头方向）。
