5.2.4 仪器讯号噪声过高
鞘液过滤器中有气泡，仪器记录了气泡产生的信号，造成了噪声数据的干扰。气泡还可以改变样本流，造成检测结果不理想；此时，仪器需要做PRIME，排除液路中的气泡干扰。如果鞘液筒吸干了，应该重新装满鞘液，然后先取下样品管进行5-10次PRIME，再换上3ml dH2O上样管HI RUN 30分钟，待鞘液流中的气泡排除之后，再进行样本测定。
5.2.5 计算机屏幕上见不到细胞显示
检查以下情况：
如果仪器一直处于STANDBY状态，则检查System Status。
如果STATUS窗日显示READY，则检查样本管中细胞浓度是否够，上样前是否混匀了。
检查实验的Instrument Settings是否正确。
检查阈值是否设置过高，导致无法检测目标细胞群。
检查CELLQuest软件Cytometer目录下的Status窗口，是否己被更新。如果未更新，说明仪器与计算机之间的通讯发生了故障，此时，应关闭计算机和FACSCalibur，重新打开仪器，继续实验。
PRIME仪器液流，去除流动室中可能存在的气泡。若流动室中存在气泡，可能使样本流的位置偏离激光束，导致无细胞信号。
5.2.6 加样针有鞘液反流
检查以下情况：
检查上样针外管是否安好，可以将外管旋下，向上推动，重新拧紧。
更换上样针上部的O型胶环。
检查液流保存系统的真空帮浦是否工作。如果样本管支撑架位于旁位时，听不到真空帮浦的工作声音，可能是真空帮浦停了，关闭FACSCalibur，再启动；移开支撑架时，如果马达仍然不动，请致电BD客户服务部门寻求帮助。
表一、常用荧光染剂
|
测量参数 |
荧光染剂 |
吸光波长(nm) |
荧光波长(nm) |
|
标示抗体用染剂 |
Fluorescein, FITC |
490 |
520 |
|
|
|
495 |
578 |
|
|
Peridinin-chlorophyll, PerCP |
490 |
677 |
|
|
Cy-Chrome |
495 |
670 |
|
|
PE-Texas Red |
495 |
620 |
|
|
PE-Cyanine 5 |
495 |
670 |
|
核酸含量分析 |
Ethidium Bromide |
510 (+ds DNA) |
595 |
|
|
Propidium Iodide |
536 (+ds DNA) |
623 |
|
|
Acridine |
480 (+ DNA) 440-70 (+ RNA) |
520 650 |
|
|
Thiazole |
509 (+ RNA) |
533 |
|
|
Pyronine Y |
560-562 (+ds RNA) 497 (+ss RNA) |
565-574 563 |
|
细胞 Viability |
Propidium Iodide |
536 |
623 |
|
|
YOPRO-1 |
480 |
515 |
|
|
Acridine |
480 |
520 |
|
|
7-AAD |
488 |
670 |
|
细胞膜电位 |
DiO-C6 (3) |
485 |
510 |
|
Mitochondrial 膜电位 |
Rhodamine 123 |
485 |
546 |
|
细胞内pH值 |
BCECF-AM |
488 |
Ratio 520/620 |
|
|
SNARF1-AM |
514 |
Ratio 587/640 |
|
细胞内钙浓度 |
Fluo4-AM |
488 |
528 |
|
|
Calcium Green-1 |
488 |
530 |
|
|
Fura Red |
488 |
660 |
|
H2O2 sensitive |
Dihydrorhodamine 123 |
505 |
534 |
|
|
DCFH-DA |
505 |
535 |
|
O2- radical sensitive |
Hydroethidine |
505 |
600 |
|
Esterase sensitive |
Fluorescein -DA |
495 |
525 |
表二、典型的仪器设定
|
|
Single Color |
Two Color |
Three Color | |
|
|
FITC |
PE |
FITC/ PE |
FITC/ PE/ PerCP |
|
Threshold |
FSC |
FSC |
FSC |
FSC |
|
Value |
52 |
52 |
52 |
52 |
|
FSC Voltage |
E00 (Lin) |
E00 (Lin) |
E00 (Lin) |
E00 (Lin) |
|
SSC Voltage |
350 (Lin) |
350 (Lin) |
350 (Lin) |
350 (Lin) |
|
FL1 Voltage |
600 (Log) |
- |
600 (Log) |
600 (Log) |
|
FL2 Voltage |
- |
540 (Log) |
540 (Log) |
540 (Log) |
|
FL3 Voltage |
- |
|
|
650 (Log) |
|
FL1 – ﹪FL2 |
0.0 % |
0.0 % |
0.7 % |
0.7 % |
|
FL2 – ﹪FL1 |
0.0 % |
0.0 % |
25.0 % |
25.0 % |
|
FL2 – ﹪FL3 |
0.0 % |
0.0 % |
0.0 % |
0.0 % |
|
FL3 – ﹪FL2 |
0.0 % |
0.0 % |
0.0 % |
17.0 % |
表三、需定期更换耗材
|
需定期更换耗材 |
更 换 时 机 |
BD目录号 |
|
BD Falcon 352052 试管 |
上机专用试管。 |
352052（泛泰公司 0800213029） |
|
BD Falcon 352235 试管 |
附滤网FALCON试管，上机前去除样品中之细胞团块，防止管路堵塞。 |
352235（泛泰公司 0800213029） |
|
BD FACSFlow |
上机用平衡缓冲液。体积 |
342003（腾达行 02-27202215） |
|
BD FACSClean |
专为细胞仪日常清洁设计。体积 |
340345（腾达行 02-27202215） |
|
BD FACSRinse |
专为细胞仪日常除污设计。体积 |
340346（腾达行 02-27202215） |
|
Mesh Filter |
以尼龙筛网去除样品中之细胞团块，防止管路堵塞。 |
Hydro-Bios |
