4. 工具板中选择多角形区隔工具，将Cursor 移至FSC/SSC散点图上，并沿着淋巴球聚落周边画出范围，连点击两次可关闭该区域。你已完成 R1区域的界定，我们将以此区域来圈选淋巴细胞。(如果要删除R1区域，您可以在工具列中点选Gates → Region list，以鼠标点选 R1，再按Delete 键删除R1 区域。删除R1区域后，可用绘图工具板，重画R1。)
5. 从Plots菜单中选择Dot Plot可复制一个同样大小的散点图，屏幕上会出现一 Dot Plot 对话方框。点击X Parameter 钮来显示 NORM001 档案中所有的参数项 (FSC, SSC, FL1, FL2) 将 X 参数项改成「FL1-H 256 Gamma-1」，Y 参数项改成「FL2-H 256 Gamma-2」。从Gate输入栏中将 NoGate 改成G1= R1。
6. 点击 OK 便完成了一个以 G1 圈选的 FL1/ FL2 散点图，可将复制图移至原图右方。NORM001 档案为本组实验之阴性对照组，我们将以之来界定阴性与阳性之界限。
7. 从屏幕左列工具板中，选取 Quadrant Marker 工具，然后在 FL1/ FL2 散点图中心处点击并拖曳至定点，一般而言是紧挨着阴性细胞聚落。
8. FL1/ FL2 二维散点图现在被区隔出四个象限，欲计算各象线中细胞的数据数据，从屏幕上方Stats菜单中选择Quadrant Stats。可以得到该图之四象限统计结果。UL：左上象限，UR：右上象限，LL：左下象限，LR：右下象限
