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流式细胞仪及流式细胞术教程
作者:未知 来源:丁香园 时间:2007-1-26

    散点图可以用来进行多参数分析,上面已经提到。至于参数选择,就可以自己选择了,也许您可以发明一种新的方法来作为试验平台呢!比如这篇文章:《New method for the analysis of cell cycle-specific apoptosis》就是在tunnel法的原理上进行的变化,产生了一种新的细胞周期特异性凋亡的分析方法:API法。

    下载链接:
    1.膜联蛋白V 与碘化丙啶用于细胞.周期特异性凋.亡的检测
    2.New Method for the Analysis of Cell Cycle–Specific Apoptosis

    3.等高线图和密度图

    这两种图其实就是密度图的变化,等高线图和地图一样。密度图则与等高线图密切联系,密度高的地方颜色就偏红些。

    常用流式软件介绍及相关下载

    1.cellquest

    cellquest是BD公司推出的针对流式的试验数据获取和分析软件。界面友好,操作简单,是目前流式相关软件中应用最多的软件之一。但该软件没有free版本,故无在家学习的可能。因此就不多介绍了!

    cellquest中文使用说明:
    CELLQUEST软件的使用手册

    cellquest 英文使用说明下载地址:
    CellQuest使用手册电子书(CellQuest Software Reference Manual)

    2.Modfit分析软件

    ModFit 是由美国Verity Software House公司设计,专门用于流式细胞术中进行细胞周期分析的软件。它通过对DNA含量直方图进行曲线拟合,能快速计算出各种倍体细胞的含量、细胞周期各时相及亚二倍体细胞所占的比例、DNA指数、G0/G1期峰的变异系数等。此外,2.0版本还增加了“同步化分析”和“增殖分析”的功能,可分别进行同步化细胞和增殖细胞的研究。

    在本版内经常出现一些运用Modfit软件进行DNA分析的图。有一些存在软件使用方面的问题,因此,软件使用操作方法将在以后的时间里在生物秀实验频道陆续介绍。

    3.WinMDI流式分析软件

    这个软件也许是朋友们最感兴趣的一个了,因为它是free版!下载地址我就不使用自己的空间了,因为网上到处都是,就是相关说明比较少,有cellquest使用经验的朋友们上手当然要快一些!

    主程序与使用说明下载地址: 
    WinMDI ver 2.9 下载
     
    使用这个软件可以使原本只能在实验室完成的工作可以转移到家里去进行。软件操作简单,内存占用少,而且是免费的,没有什么版权问题,是值得强力推荐的一个流式分析软件!

    4.其它:

    如FCSExpressV3Full是个很好的软件,生成图形漂亮,可惜30d的试用期,我重装系统后一直不舍得安装,等需要的时候再安装使用吧。
    还有testDNA、analyse、Winlist等,均可以作为辅助软件进行流式资料分析。

    关于补偿和gate

    关于补偿

    在流式荧光之间有相互干扰时,补偿就显得尤为重要了,版内经常有如Annexin V-PI染色检测细胞凋亡的流式图片,但是可以看出,一部分的补偿没有调整好,轻则影响数据准确性,重则出现错误结果!

    以下是一个如何学习补偿的PDF,和流式彩色图谱里的基本相同!

    关于gate

    gate是流式分析中的一个“人为因素”很强的分析过程。很多战友对gate如何做存在疑问。实际上,gate和compensation一样,是有依据的,而不是“人为”的。

    比如:全血细胞中想用流式分出淋巴细胞,需要在FSC/SSC上做gate。这个gate就是根据全血细胞中各种细胞的大小、颗粒性分出来的。在图上可以将它们分为几个区域,每个区域由于细胞大小,颗粒性的不同而集中在一起。我们可以画一个gate分出目的细胞。

    相关内容很多,不同的试验根据不同的原理,做不同的gate。下面是一个关于gate的PDF!

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