3、以溴化脱氧尿嘧啶(Brdu)和Hoechst33258染料进行细胞周期分析。
(1)试剂：
用培养基配制33 mg/L Brdu及脱氧细胞苷26.4g/mL。
染色液：Hoechst33258溶于PBS，细胞染色24小时后进行分析，据报道染色的稳定时间在30分钟至24小时之间。
(2)方法：
①将Brdu溶液按1:10加入细胞培养液中。
②根据细胞周期时间不同，选择不同时间培养的细胞。
③孵育后，摇散细胞以传代培养。
④直接用染液重悬细胞，进入流式细胞仪分析。
Hoechst33258荧光值在410～580nm之间，需用330～360nm紫外光激发。应特异性结合腺嘌呤-胸腺嘧啶碱基对。因此，不仅特异性标记DNA，亦可标记胸腺嘧啶。在细胞周期分析时，在与细胞孵育过程加入Brdu,Brdu可替代DNA中的胸腺嘧啶，因此，处于合成期内的细胞表面上仍保持二倍体状态，并在分裂后G1峰的半峰处产生一新峰，此项技术可用于直接测定细胞G2期及分裂时间。
4、Hoechst33342染色活细胞DNA
(1)试剂：Hoechst 33342,用蒸馏水配成0.25mol/L。
(2)方法：
①制备106/m细胞悬液，以Hoechst33342染色，浓度为5～10 mg/L ，室温下20分钟。
②分析前切勿洗涤细胞。
Hoechst33342可用作细胞DNA的活体染料，据信可在保持细胞活性的同时，呈现出相当好的DNA化学计量关系，激发波在紫外范围350～363nm之间，发射波则在450nm处。
5、以异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyante FIFC）染色蛋白质。
(1)试剂：异硫氰酸荧光素(FIFC)用含40 mg/L RNase的PBS配成0.1～1.0 mg/L浓度。
(2)方法：
①染色前用终浓度70%乙醇固定细胞，至少18小时。
②离心固定细胞，弃去固定液。
③室温下用FIFC染色细胞蛋白，30分钟。
④流式细胞仪分析，使用氩激光，激发波长488nm，荧光发射波长515～535nm。
也可于固定细胞中，以18 mg/L (0.1%柠檬酸盐配制)和0.05 mg/L FIFC(含40 mg/L RNase，PBS配制)染色20分钟以上可对DNA和蛋白质双重染色，分别呈现红色荧光（DNA）和绿色荧光（蛋白质）。
6、荧光素抗体的应用
该技术既可用于检测带有特异性膜抗原的细胞，可用荧光素或若丹明标记单克隆抗体处理上述细胞；也可用于测定胞浆中的蛋白质(如凋亡BCL-2蛋白，抗病毒蛋白MXA等)，后者在细胞凋亡章节中已介绍从略。
用磷酸盐缓冲液Eagle’s MEM稀释FIFC连接的抗体内含0.1%叠氮钠、2%牛血清。为判定FIFC抗体的最适度的稀释浓度，向微量滴定板的细胞中加入50μL不同浓度的稀释液，再以荧光显微镜确认最佳染色浓度。使用抗人LEU-I抗体分析时，应稀释成5 mg/L或 0.25 mg/L。无论鼠或人细胞在2×107浓度时其存活率应在90%以上。
方法：
(1)于微量滴定板加入50μL抗体稀释度，再加入50μL细胞悬液，混匀。
(2)冰浴45分钟，离心滴定板（1500r/min 10分钟）。
(3)弃上清，以培养基100μL洗涤细胞沉淀2次，每次洗涤后用1500r/min 10分钟，弃上清。
(4)以1ml预冷的培养基配成1×106细胞/mL的已染色细胞悬液，进样前持续保持冷环境(4℃)。
目前流式细胞仪(FCM)已在各学科中获得应用。
①细胞生物学：定量分析细胞周期并分选不同细胞周期时相的细胞；分析生物大分子如DNA、RNA、抗原、癌基因表达产物等物质与细胞增殖周期的关系，进行染色体核型分析，并可纯化X或Y染色体。
②肿瘤学：DNA倍体含量测定是鉴别良、恶性肿瘤的特异指标。近年来已应用DNA倍体测定技术，对白血病、淋巴瘤及肺癌、膀胱癌、前列腺癌等多种实体瘤细胞进行探测。用单克降抗体技术清除血液中的肿瘤细胞。
③免疫学：研究细胞周期或DNA倍体与细胞表面受体及抗原表达的关系；进行免疫活性细胞的分型与纯化；分析淋巴细胞亚群与疾病的关系；免疫缺陷病如艾滋病的诊断；器官移植后的免疫学监测等。
④血液学：血液细胞的分类、分型，造血细胞分化的研究，血细胞中各种酶的定量分析，如过氧化物酶、非特异性酯酶等；用NBT及DNA双染色法可研究白血病细胞分化成熟与细胞增殖周期变化的关系，检测母体血液中Rh(+)或抗D抗原阳性细胞，以了解胎儿是否可能因Rh血型不合而发生严重溶血；检测血液中循环免疫复合物可以诊断自身免疫性疾病，如红斑狼疮等。
⑤药物学：检测药物在细胞中的分布，研究药的作用机制，亦可用于筛选新药，如化疗药物对肿瘤的凋亡机制，可通过测DNA凋亡峰，Bcl-2凋亡调节蛋白等。
