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液相色谱常见问题及其解决方法
作者:未知 来源:生物秀 时间:2007-1-8

    谱图问题
    1、 问:造成峰拖尾的原因是什么,如何消除?
    答:a.筛板阻塞;反冲色谱柱、更换进口筛板
      b.色谱柱塌陷;填充色谱柱
      c.有干扰物质的存在;使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱
      e.流动相PH值不合适;调整PH值,对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰
      f.样品与填料表面的溶化点发生反应;加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱
    2、 问:造成峰分叉的原因是什么,如何消除?
    答:保护柱或分析柱污染;取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。样品溶剂不溶于流动相;改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。
    3、 问:K值增加时,拖尾更严重,这是为什么?
    答:反相模式,二级保留效应;
      a.加入三乙胺(或碱性样品)
      b.加入乙酸(或酸性样品)
      c.加入盐或缓冲剂(或离子化样品)
      d.更换一支柱子
    4、 问:保留时间的波动有几种可能的原因?
    答:温控不当;调节好柱温。流动相组分变化;防止流动相蒸发、反应等,做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。色谱柱没有平衡;在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。
    液相色谱常用符号与术语表
    ACN 乙腈 Acetonitrile
    AUFS 满量程的吸光度单位 Absorbance units, full scale
    As 峰不对称因子
    B 二元流动相中的强溶剂;例如:反相HPLC的甲醇/水混合液中的甲醇
    BSA 牛血清白蛋白(一种蛋白质) Bovine serum albumin
    CAF 咖啡因(中性溶质) Caffeine
    CRF 色谱响应因子 Chromatographic response function;色谱图总分离度的定量指标
    dc 色谱柱内径(cm)
    DMOA 二甲基辛胺 Dimethyloctylamine
    DNB 2,4-二硝基甲酰(基) 2,4-Dinitrobenzoyl
    dp 色谱柱填料的粒度(cm)
    DRYLAB 液相资源公司(LC Resources INC.)的计算机模拟软件。DRYLAB I用于等度预测,DRYLAB G用于梯度预测
    F 流动相的流速(ml/min)
    FC-113 1,1,2-三氟-1,2,2-三氯乙烷
    GPC 凝胶渗透色谱法 Gel-permeation chromatography
    HA 酸性溶质,能电离出A-
    Hex 己烷 Hexane
    hr 二相邻谱带之间的谷高
    HVA 高香草酸 Homovanillic acid
    h’ 峰高
    h1,h2 相邻谱峰1和谱峰2的峰高
    IEC 离子交换色谱法 Ion-exchange chromatography
    IP 离子对 Ion-pair
    IPC 离子对色谱法 Ion-pair chromatography
    J 色谱峰强度参数
    K’ 所给谱峰的容量因子,k’=(tR-t0)/t0=tR’/t0,tR=t0(1+k’)
    k 梯度洗脱过程中,某溶质的k’的平均值或有效值
    kw 以水做流动相k’的外推值
    k1,k2 相邻谱峰1和谱峰2的容量因子
    L 色谱柱长度(cm)
    Lc 检测器流动池光路的长度(cm)
    M 溶质的分子量
    MC 二氯甲烷 Methylene chloride
    MDST 混合设计统计技术 Mixture-design statistical technique;一种优化流动相的软件
    MeOH 甲醇 Methanol
    MTBE 甲基叔丁醚 Methyl-t-butyl ether
    MW 溶质的分子量
    N 色谱柱塔板数
    NAPA N-乙酰普鲁卡因胺 N-Acetylprocainamide(碱性溶质)
    N0 检测器的基线噪音
    ODS 十八烷基硅烷 Octadecylsilyl
    P 色谱柱的压力降[通常以巴(bar)表示,也用psi;另外,也用作柱极性参数
    PA 普鲁卡因胺 Procainamide(碱性物质)
    PAH 聚芳香烃 Polyaromatic Hydrocarbon
    PESOS 优化流动相的计算机软件(美国Perkin-Elmer产品)
    pKa 溶质酸性常数的负对数;当pH=pKa时,溶质中有一半是电离的
    Rk 保留值范围,Rk=(最末谱峰k’)/(最初谱峰k’)
    RRM 相对分离度图(通常N=10000)
    Rs 相邻二谱峰的分离度
    S 当流动相中的%B改变时,测量溶质保留值的变化速率的参数
    SAL 水杨酸 Salicylic Acid
    SEC 尺寸排阻色谱法 Size-exclusion chromatography
    S/N 信噪比 Signal to noise ratio
    t 分离时间(min)(样品进样时t=0)
    tp 梯度系统的滞后时间(min)
    TBA 四丁基铵离子 Tetrabutylammonium ion
    TEA 三乙胺 Triethylamine
    THF 四氢呋喃 Tetrahydrofuran
    tk 在用于校正等度洗脱溶剂强度的流动相离开梯度混合器时,梯度洗脱的时间
    TLC 薄层色谱法 Thin-layer chromatography
    TMA 四甲基铵 Tetramethylammonium(盐)
    TMS 三甲基硅烷 Trimethylsilyl
    t0 色谱柱的死时间(min)
    tR 溶质的保留时间(min)
    tG 梯度时间(min),即梯度开始至结束的时间
    t1,t2 相邻谱峰1和谱峰2的保留时间(min)
    ti 色谱图中第一峰的保留时间(min)
    tf 色谱图中最末峰的保留时间(min)
    △tg tf-ti
    tx (tf-ti)/2
    UV 紫外光

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