酶标仪使用注意事项
1、 工作环境
酶标仪是一种精密的光学仪器，因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。
A. 仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。
B. 仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。
C. 为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。
D. 操作环境温度应在15°C~40°C之间，环境湿度在15%~85%之间。
E. 操作时电压应保持稳定。
F. 操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘。
G. 保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。
2、 操作注意事项
许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果，操作过程随意性较大，在使用酶标仪后操作必须规范。
A. 使用移液器加液，移液枪头不能混用。
B. 洗板要干净，避免交叉污染。
C. 严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。
D. 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成注意做好清洁工作。
E. 不要在测量过程中关闭电源。
F. 对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。
G. 使用后盖好防尘罩。
H. 出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。
酶标（ELISA，EIA）诊断试剂盒操作中出现的问题：现象、可能原因和解决办法
|
现象 |
可能原因 |
解决方法 |
|
显色淡、灵敏度偏低 |
试剂盒没有按规定保存，受高温影响 |
不要将试剂盒长时间置于室温下，按使用规定储藏 |
|
试剂盒超过有效期 |
不要使用 | |
|
试剂、样品使用前未能平衡 |
用前试剂、样品置室温平衡30分钟 | |
|
移液器计量不准，吸嘴(tips)不清洁或含水份 |
校正移液器，移液器与吸嘴配合要紧密吻合，移液不宜太快，排放应完全，吸嘴最好一次性使用 | |
|
恒温箱或孵育温度不到37°C |
注意温度并及时调节，不宜多打开机盖 | |
|
保温时间不够 |
要准确定时 | |
|
洗涤冲击力太大，洗液浸泡时间太长，洗涤次数过多 |
按说明书要求注意控制洗涤冲击力，洗涤时间和洗涤次数 | |
|
显色剂加量不足或顺序颠倒或A、B液混合后加入 |
滴加显色剂时滴瓶应垂直，持力均匀，先加A再加B，不可混合后加入；必要时用移液器加液 | |
|
底物（显色液）作用时间不够 |
准确定时 | |
|
蒸馏水水质有问题 |
测定蒸馏水水质 | |
|
样品用了防腐剂(NaN3)，抑制了酶的反应 |
样品不能用防腐剂 | |
|
重复性差 |
样品数量不一，加样时间长短不一 |
重复某一样品时，加样尽可能与第一次接近 |
|
样品加入后未混匀 |
加样后充分混匀（或混匀后加样） | |
|
酶标滤光片不对或输入波长不对 |
TMB用450/630，PNPP用405/630波长 | |
|
酶标仪测定重复性差 |
校对酶标仪并注意清洁 | |
|
洗涤不正确 |
自动洗板时不应有堵孔，洗涤液注满各孔而又不要溢出，洗涤充分，残留量少 | |
|
温育条件不一致（一次水浴，一次用温箱） |
恒温较水浴显色深 | |
|
不慎多加或少加酶或显色剂，操作过程个别孔液体外溅，酶、显色剂滴于孔壁上 |
多加显色深，少加则浅，防止液体外溅，用吸水纸吸干孔壁上残留的酶或显色剂 | |
|
不同批号试剂盒中组份混淆使用 |
尽量不要将不同批号试剂混合使用 | |
|
阈值附近时阴时阳 |
同一样品做三个或多个复孔，以二个以上相同者为准 | |
|
加样量、保温时间、洗涤、操作人员不一致 |
尽可能使用同一移液器和装紧吸嘴重复测定标本，条件、人员应尽量与上次保持一致 | |
|
阳性对照不显色，出现一片白 |
蒸馏水有问题 |
与好的蒸馏水比较 |
|
洗液配制有误 |
按说明书配制 | |
|
终止液误作洗液稀释或当底物缓冲液配制 |
每次配制时注意看请试剂标签 | |
|
漏加酶或显色剂 |
不要漏加，注意观察液面高度 | |
|
某一容器未洗净，残留有灭活酶物质 |
使用的容器要洁净、可靠 | |
|
全部呈有色 |
水质问题 |
防止蒸馏水污染 |
|
加酶量过多 |
注意检查移液器及设定加样量 | |
|
温度超过37°C，或酶结合时间或显色时间超过 |
注意温度和时间 | |
|
洗涤不充分，样品中有其它成分残留，或有残留酶 |
充分洗涤，减少残留 | |
|
底物（显色液）配制时间过长，受光照或受污染 |
按说明书严格操作并需避光 | |
|
样品放置时间过长，污染 |
样品应保持新鲜，或低温保存，防止污染 | |
|
移液吸嘴重复使用，未洗净或消毒不完全而用于加酶或底物 |
吸嘴尽可能一次性使用 | |
|
花板 |
操作不慎 |
按说明书洗板，加样，显色 |
|
洗针堵孔，残留液较多，加或吸洗液不均匀 |
检查洗针并进行调整 | |
|
样品离心处理不完全，有凝血或残留细胞成分 |
离心3000rpm 6分钟以上 | |
|
显色顺序前后不均 |
样品量过大，加试剂时间过长，反应时间不一致（特别是对于反应时间短的试剂盒） |
注意控制加样的时间 |
注意：
1、 不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同，务必按照所用试剂盒严格操作，否则容易产生检测结果的不确定性。（生物秀仪器频道 www.bbioo.com）
2、 若不同批号试剂的不同组分（A液或酶工作液），或不同试剂的不同组分进行交叉使用，有可能出现显色浅或本底高，花板等情形。
3、 加样时样品量误差，对于阴或很阳的标本影响不大，但对阈值附近的标本影响极大，建议校对加样器。
4、 反应时间的误差，做大量标本时，第一孔和最后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。
5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加样器，不排除不同滴头滴量的误差。另外滴加过程中是否产生气泡、速度是否均匀，是否颤动等影响液量的因素均可导致以上情况。高标准要求时应使用加样器。
6、 阈值附近实际上是个灰区（gray scale）,不能截然分为阴性、阳性，国外厂家均要求对这部分可疑标本进行奇数次复检，以次数多者为准，如一次阳两次阴最后判为阴，但实际上是否为阴不好说，只有判为可疑，临床上可以让患者过一段时间后再测。
7、 肉眼观察稍显色，酶标仪打印为阴性的标本在实际工作中是难以避免的，肉眼目测结果不可靠，应以酶标仪判读为准。
8、 由阴性变为强阳性原因多为操作过程中漏加试剂等有关。
9、 临界值附近标本波动为正常现象，任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。
