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SPOT软件操作手册
作者:未知 来源:先达科技 时间:2007-12-18

    选取图像类型(Bits per Pixel)
    (8位单色/12位单色/24位RGB/36位RGB/48 位RGB)
    [拍摄彩色图像一般选择24RGB,因为一般第三方软件均支持此方式。如果是拍摄荧光,在滤光片的选择上最好选择要拍摄的荧光的颜色,这样速度快,图像质量好(例如拍摄绿色荧光,则只选择绿色滤光片)]
    选定曝光方式(Exposure Type)(自动曝光/手动曝光)
    一般情况下选择自动曝光,这样质量会较好,方便调节参数。
    GAIN 值的选择
    Gain值所代表的意思是为CCD芯片中最亮的一点所容纳的电子数,其中1为容纳最多电子数为满井电子数,2代表为容纳最多电子数为满井电子数的1/2,依此类推,16代表容纳电子数为满井电子数的1/16.拍摄透射光时,可以选择任意值,推荐为8;拍摄荧光时,推荐使用1或2。
    调节曝光因子(Adjustment factor),数字越大,实际曝光时间越长
    〔适用于拍摄荧光,特别是以下情况:如果在拍摄的图像中有一点特别亮,其他的都很暗,并且这个亮点是一个杂点或是不需要的,我们需要的则是那些暗的。这时我们就可以调节这个值(如调节为2.3,他的意思就是在实际的曝光基础上乘以一个2.3的系数)这样再拍摄,就会发现原来的亮点会曝光过度,但是原来不清楚的图像现在则变清楚了〕(生物秀仪器频道 www.bbioo.com
    BINNING选择
    光线弱时,可选定BINNING方式,以提高灵敏度,节省时间。数字越大,灵敏度越高;推荐拍摄弱荧光时使用2*2
    选择时要注意以下情况:如果要做图像叠加,则一定要使用相同的Binning,否则图像会错位!
    选择曝光顺序
    如果相机为3次曝光相机,则曝光顺序可以调整(特别是拍摄比较容易淬灭的荧光时),将容易淬灭的荧光先拍摄。顺序即是RGB的各种组合(R-代表红色,G-代表绿色,B-代表蓝色)
    选定芯片成像区域
    Full Chip     整个芯片成像
    Center          中心区域成像,通过设定百分比决定区域的大小
    Region         设定成像区域的坐标
    点击要采取的后处理方式,Spot会在获取图像之后对其进行相应处理后再显示在屏幕上。

    四. 常用的拍摄技巧
    1) 在使用LIVE功能时,选择cortrol 可以调节一些参数。(如预览图像显示的颜色,Binning格式,图像的亮度速度与质量的关系等。其中在拍摄弱荧光时推荐Binning使用2*2或3*3,亮度值可稍微调高一点,速度与质量的选择偏向于速度)
    - 注〔这些参数的默认值一般为:bright为1.0,grama为1.4〕
    2) 拍摄时如果不想把整幅图片都拍下来的话,也可以这样作:先拍摄一幅图片,从中选择感兴趣的区域,用鼠标划出来,然后选择camera――Set Chip Imaging Region 然后会出现对话框,点击OK,这样再拍摄时就会只拍摄您感兴趣的区域,
    - 注 作这些工作的前提是载物台一定不能动,如果要拍摄另一个视野则先要把成像区域改为full chip〔做法如下,右键点击右下角的拍摄放案,选则modify,再选择full chip 即可〕
    3) 明场拍摄方案一般就使用默认的数据就可以.拍摄荧光时,可能要作一些调整。例如如果荧光比较暗,或淬灭比较快,就可以把Binning改为2*2,Gain值改为2或4
    4) 白平衡功能(适用于明场拍摄) 有时由于灯的缘故拍摄出来的图片会整体发黄,或发蓝,这个时候就可能要使用白平衡来解决问题。具体做法如下:在屏幕菜单中选择White Balance (右侧一个天平形状的图标),将载玻片聚焦好然后移到一个空视野的区域,光路转到拍摄状态,点击begin ――ok 即可
    - 注〔白平衡与光的强度密切相关,光的强度变化了可能就需要作白平衡〕
    5) 平场较正 有时拍摄出来的图片会四个角发暗,或由于镜头较脏,使得图片上一直有一些暗斑,具体调整方法如下:首先将载玻片在目镜下聚焦好,然后拿走玻片,将光路转换到拍摄状态,点击camera―――Get Flatfield Image,相机自动拍摄,然后会出现对话框,给他起一个名字点击ok就可以了

    五. 图像编辑功能
    图像增强
    使用图像增强功能可以提高图像质量,突出重点。做法如下
    1) 点击Edit菜单
    2) 选取Adjust RGB(或HSL/HSV),再选定Adjust Histogram,移动滑动条(两个三角)来改变图像显示效果;{这个操作主要是为了去掉拍摄时的噪音,使图像变得更清晰,后面的那个三角向前拉会使图像变得更亮}〔在拍摄单色光的时候特别要调节一下,只选择单色光波峰所在的区域,图像效果最好〕
    3) 选取Filter,可对图像进行平滑,锐化等操作。
    图像叠加
    1) 点击Edit菜单;
    2) 选定Merge Images; 然后选则要叠加的图像,(即白色框内的显示的位置) 也可以从硬盘上直接选则图像,将其合成一幅图像。该功能在拍摄多探针荧光图像等情况下非常有用。

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