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库勒照明系统(Kohler illumination system)的正确调整
作者:沈彬源 来源:生物秀 时间:2007-12-16

    ◇顺便多说一下, 成像视野的亮度应该只能使用减光率不同的中性减光滤光片插进照明光路中来调节, 或者调整光源的工作电压来调节; 但对于彩色显微照相来说, 调整电压会引起光源色温的变化, 使彩色出现偏差;(以后有机会介绍显微照相时再对这一方面作较详细的讲解);
    ◇关于聚光镜孔径光阑大小的调节, 不应单纯考虑与所需要的物镜数值孔径保持相同, 同时还要考虑所成像的质量问题. 以综合的考虑来说, 聚光镜的孔径光阑应收小到能使成像获得足够的反差,  但又不致于小到要损失分辩率和细节. 通常, 孔径光阑的大小收小到等于所用物镜出射光瞳的2/3或4/5就可以了, 这是在最大分辩率与最佳反差间所作的折衷.
    (要看到孔径光阑的大小, 可以把显微镜的其中一个目镜从其双目镜筒的座子上拔出, 再把眼睛在离镜筒口约10-20mm处望进去, 就可看到物镜的出射光瞳面上的孔径光阑像, 如图3所示:
    下面以显微照相的照片来说明孔径光阑的设定对于成像质量的影响:
    八、九十年代期间, 我在全国各地安装、培训显微镜的讲课上, 因为有实在的显微镜可以作上述的演示,并且着重强调了孔径光阑的重要作用; 但讲义上则因当时的微电脑应用技术并未像今天如此完善, 也就没有如此详细的图解.


    图3a. 这是一张组织切片, 当聚光镜孔径光阑(左图)开大到与物镜的数值孔径接近时, 虽然存在着相当大量的杂散光和眩光, 但大部分的细节都可见; 只是看起来好像蒙上了一层灰雾. 所以开大孔径光阑的效果不可能是增加视野的亮度, 效果上反而是降低了分辩率并使反差变坏!


    图3b. 这是同一张组织切片, 当聚光镜孔径光阑(左图)收小到等于物镜数值孔径的 80% 时, 眩光减少了, 成像亮度有所减弱但细节却显得较为丰富而非常清晰, 成像的细节显现出没有明显的衍射假象; 这是在最大分辩率与最佳反差之间作了最佳的折衷. 作显微照相时就要把孔径光阑严格控制在这一大小上下.


    图3c. 这还是同一张组织切片, 当聚光镜孔径光阑(左图)收小到等于物镜数值孔径的 60% 时, 由于衍射假象和折射现象的存在, 使成像细节变得有些不太清晰与阴暗, 所以与原有样品的色调有所偏差.

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