五、激光扫描共焦显微镜技术的应用
定位、定量
三维重组
动态测量
¨ 活细胞或组织内游离Ca2+浓度的测量
¨ 活细胞内H+浓度（ pH值）的测量
¨ 自由基的检测
¨ 药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量
应用：细胞膜电位的测量
荧光漂白恢复（FRAP）的测量
笼锁解笼锁的测量
荧光能量共振转移（FRET）的测量
其他应用
1、定位、定量
免疫荧光标记（单标、双标或三 标）的定位、定量。如：细胞膜受体或抗原的分布，
微丝、微管的分布、 两种或三种蛋白的共存与共定位、蛋白与细胞器的共定位
细胞凋亡: AnnexinV-fitc + PI
末端原位杂交-fitc + PI
荧光原位杂交： 染色体基因定位
单细胞凝胶电泳
GFP的表达
游离Ca2+ 的分布与定量
定位、定量研究中常用荧光探针
1）Amine-Reactive Probes与抗体耦联、与配体耦联、与肽耦联、与人工合成的寡聚核苷酸耦联的探针，可用于免疫组化、荧光原位杂交、受体标记等
2）FITC (fluorescent isothiocyanate) BODIPY FL 503/512
3）异硫氰基荧光素 494/518
4）TRITC 四甲基异硫氰基罗丹明 544/572 BODIPY TMR 543/569
5）Texas Red 德州红 595/615 BODIPY TR592/618
6）PE 藻红蛋白 565/578
7）cy3 490/530
8）cy5 650/690
(1)细胞表面抗原、胞内某种蛋白
免役荧光标记： 与抗体耦联,
直标: 一抗+荧光探针
间标: 二抗+荧光探针 如: 微管蛋白 抗 tublin抗体+荧光探针 肌动蛋白 Palloidine+荧光探针
(2)细胞膜表面受体
配体+荧光探针 如: nAchR、mAchR、多巴胺受体(D1,D2)
标记 Gm1: 霍乱毒素受体 霍乱毒素+FITC
2.标记细胞器荧光探针
(1)线粒体 Mitochondria Rodamin 123 505/534 ，可染活细胞，阳离子性,可检测线粒体膜电位, 且在多数细胞中停留时间短
JC1 线粒体膜电位低时为单体 490/527 发绿光
线粒体膜电位低时为多聚体 490/590 发红光
可标记活细胞线粒体，且为检测线粒体膜电
位最佳探针: Mitotracker Green FM 490/516, 染活细胞或固定细胞 ,
稳定不漏出: Mitoracker Orange CMTMRos 551/576, (氧化型)Mitoracker Orange 还原型, 只能染活细胞
(2)溶酶体 Lysosome中性红 541/640: 微偏碱性, 可标记溶酶体等酸性器官为非特异性
AO : LysoTracker Green DND-26 504/511, 染活细胞 LysoTracker Blue LysoTracker Red
(3)内质网 Endoplasmic Reticulum DiOC6 484/500: 非特异性, 较高浓度标记内质网,较低浓度标记线粒体
(4)高尔基体 Golgi apparatus NBD C6-ceramie 466/536, 可染活或死细胞 ¨细胞器的单克隆抗体
(5)细胞核 PI propidium iodide 536/617 DNA/\RNA 死细胞
碘化丙啶EB ethidium bromide 518/617 DNA/RNA 死细胞
Hochest 33342 352/461 DNA A-T 活细胞
Hochest 33258 (同上)
DAPI 358/461 DNA A-T 半通透细胞
Chromomycin A3 450/470 DNA G-C
AO 500/526 DNA 活细胞
460/650 RNA TOTO-1 514/533 DNA 死细胞
SYTO 活细胞
