每一幅焦平面图像实际上是标本的光学横切面，这个光学横短面总是有一定厚度的，又称为光学薄片。由于焦点处的光强远大于非焦点处的光强，而且非焦平面光被针孔滤去，因此共聚焦系统的景深近似为零，沿Z轴方向的扫描可以实现光学断层扫描，形成待观察样品聚焦光斑处二维的光学切片。把X-Y平面（焦平面）扫描与Z轴（光轴）扫描相结合，通过累加连续层次的二维图像，经过专门的计算机软件处理，可以获得样品的三维图像。
LSCM的基本特点
观察方式：以荧光为主
光源：激光（紫外、可见光、近红外）
照明方式：点照明、逐点扫描
成像方式：共聚焦、逐点成像
输出：实时观测,数字化图像，可以进行图像处理和定量分析
多重染色样品的观察
3. 共聚焦扫描显微镜在生命科学研究中的应用
细胞结构、蛋白质（如受体、抗原、抗体、酶、细胞
骨架蛋白等基因表达产物）、DNA、RNA等
细胞膜流动性（荧光光漂白恢复技术）
细胞内氧自由基活性
细胞内钙离子浓度变化
膜电位
三、试剂与器材
青蛙
冷丙酮、 DAPI 、甘油/PBS封片剂、滤纸、吸管、载玻片、盖玻片
激光扫描共聚焦显微镜
四、实验步骤
1.取涂有细胞的载玻片（细胞涂在中间），冷丙酮40C固定10min;
2.PBS漂洗2次，每次3 min;
3.滴加DAPI溶液100 ul室温孵育30 min;
4.PBS漂洗3次，每次5min;
5.滴一小滴甘油/PBS封片剂(pH8.5，PBS:甘油=1:9，v/v)封片;
6.激光扫描共聚焦显微镜观察。
五、注意事项
注意染色时间
注意避光
