（示范：细胞形态观察与暗视野显微镜的使用）

实验目的与教学要求
1.掌握荧光显微镜的成像基本原理及其使用；
2.掌握暗视野显微镜的成像基本原理及其使用。

一、荧光显微镜的成像原理
荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。

什么是荧光 ?
物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。
即：物质吸收短波光，发射出的长波光。

荧光的性质
保持固有的荧光特性
荧光波长＞激发波长
荧光强度极小于激发光的强度
有不同程度的衰减
荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率

荧光显微镜的优点和用途(生物秀仪器频道 www.bbioo.com)
优点：
检出能力高
对细胞的刺激小
能进行多重染色
用途：
物体构造的观察
荧光的有无、色调比较进行物质判别
发荧光量的测定对物质定性、定量分析

荧光素的特性
 

荧光显微镜技术在生命科学研究中的应用
1.对细胞结构或组分的定性、定位、半定量研究。
2.作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。

二、暗视野显微镜的成像原理
通过特殊的暗视野聚光器，使照明光线改变途径，不直接进入物镜，而是倾斜地照射到样品上，由样品表面的绕射光线入射到物镜内，产生样品的衍射图象。

三、试剂与器材
青蛙、洋葱、人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片（HE染色）
甲醇、1‰ 丫啶橙、滤纸、吸管、载玻片
荧光显微镜、暗视野显微镜、普通光学显微镜

四、实验内容和实验步骤
1.蛙血细胞染色观察：取少许蛙血 → 常规血涂片→ 凉干 → 甲醇固定10 min → 1‰ 丫啶橙染色5 min  → 水洗 → 室温干燥（滤纸擦干玻片底面） → 荧光显微镜观察（先低倍后高倍观察） （可在同一玻片上观察未荧光染色的血细胞）
2.取洋葱→撕取一小片内表皮→平面单层铺展于玻片上→室温凉干→1‰丫啶橙染色5min →水洗（用吸管，小心掉片） →室温干燥（或用滤纸擦干） →荧光显微镜观察
3.暗视野显微镜观察蛙血细胞（示范）
4.观察人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片（HE染色）

五、注意事项
荧光显微镜要在光线尽量暗的环境下观察。
使用荧光显微镜时要注意不要直接观察激发光源，保护眼睛。
暗视野显微镜要在光线尽量暗的环境下观察。