Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。由于所设阈值都很低,所以Ct值分析实际上就是低浓度的荧光值分析。由于是低浓度,影响因素小,误差没被放大,所以具有良好的重现性
由图可以看到当扩增越靠后定量的重复性就越差。主要是因为①荧光定量技术要求在低浓度坏境。因为荧光检测定量原理是在忽略分子间相互作用的情况下建立的。如果分子浓度高了,影响作用很复杂,而PCR扩增产物是高浓度的,因此重复性变差也很容易理解。②由于扩增末期,扩增效率可能因为大量的靶序列而产生不可控的影响。
仪器的Ct值定量原理
固定循环数后,荧光信号与模板数成正比,但当固定荧光信号值后,模板数就与循环数成反比。每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
1890型PCR荧光分析仪的特点
-高速的加热降温循环系统
-采用长寿命的LED激发光源
-可对PCR扩增全过程进行实时动态监测
-无需开启PCR反应管,可避免在PCR期间及PCR之后产物污染,确保结果准确
-可用三种不同报告染料同时用于一个样品,在单一反应中取得更多信息
-全中文界面,灵活的程序设定、全面的分析和报告功能,全部参数可储存
-可打印多个或单个样本报告
仪器主要技术规格
样本数: 32
反应管(光学玻璃管)长: 35mm
容积(反应体积) 10-20ul
温度范围: 40℃-98℃
温度控制: 1℃/S-10℃/S
激发光波长: 470nm(LED)
发射光波长: 530,640,710nm
检测灵敏度: 可在一个基因组中检测单拷贝
软件操作系统: Win2000
输入电源/功率: AC220V 50HZ/800VA

