实时荧光定量PCR的应用
临床方面的应用
疾病的临床早期诊断
建立病原体病分子诊断标准
疗效考评
指导制订感染性疾病合理治疗方案
了解感染性疾病病人用药后病情的变化情况
医院、血站及防疫站的确诊
新药研究中药物的作用效果
研究Elisa方法的漏检率
病毒性疾病中病毒的耐药性变异株的测定，为疾病治疗进行指导
遗传病诊断中的应用
等位基因检测
多基因遗传病的突变检测
基因表达异常所致遗传病检测
在肿瘤诊断中的应用
肿瘤相关基因表达的检测
肿瘤标志物（肽类激素和酶）
肿瘤耐药基因（MDR）
何谓PCR ?
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)简称ＰＣＲ，是一项在短时间内大量扩增特定的ＤＮＡ片段的分子生物学技术。 
试剂的定量原理：
Taqman水解探针定量
Roche杂交探针定量
分子信标定量
SYBR Green Ⅰ染料定量
Taqman探针、杂交探针、分子信标都是通过荧光能量共振转移
直接或间接的产生特定波长的荧光，使仪器能检测到
PCR的发展史
这项技术的发明人是Kary Mullis。１９８３年，在一家生物高技术 公司（Ｃｅｔｕｓ）工作的Mullis着手解决用简单的方法鉴定某一段ＤＮ Ａ的技术问题，有一天晚上他驱车在北部加州１０１号高速公路上，灵机一动想到了一个实际上可以无限扩增某段ＤＮＡ的简单方法，即ＰＣＲ。 在１９８５年的一次学术会议上，此方法首次被介绍，在分子生物科学家 中也引起了强烈的反应。Ｃｅｔｕｓ给了Mullis一万美元的奖金，随后 把这项技术的专利以三亿美元的价格转让给另一家生物高技术公司。在短 短的几年内，ＰＣＲ迅速成为分子生物学的一项常规手段，并得到了广泛 的实际应用，被许多科学家视为近十年来分子生物学领域最重要的一项技 术突破。１９９３年，Mullis因此获得诺贝尔化学奖.
PCR原理和方法: (一)
众所周知，ＤＮＡ是由四种碱基按互补配对原则（即腺嘌呤Ａ对胸腺 嘧啶Ｔ，鸟嘌呤Ｇ对胞嘧啶Ｃ）组成的螺旋双链。在细胞内，ＤＮＡ复制 时，解螺旋酶首先解开双链让它变成单链做为模板，然后，另一种酶--ＲＮＡ聚合酶合成一小段引物（ｐｒｉｍｅｒ）结合到ＤＮＡ模板上，最 后，ＤＮＡ合成酶以这段引物为起点，合成与ＤＮＡ模板配对的新链。ＰＣＲ即是在体外模拟ＤＮＡ复制的过程，它用加热的办法让所研究的ＤＮＡ片段变性变成两条单链，人工合成两个引物让它们结合到ＤＮＡ模板的两端，ＤＮＡ聚合酶即可以大量复制该模板。 假定我们要研究的ＤＮＡ双链两端的序列是： TATTCGGGCTTTCCAAGCAACTAG...........GATCTATCCAACGGCTAGGCATTT ATAAGCCCGAAAGGTTCGTTGATC...........CTAGATAGGTTGCCGATCCGTAAA
在ＰＣＲ之前，我们首先人工合成两段有２０－３０碱基的引物，能够分别与上下两条链的一端配对，比如一条是（为与模板能够区别，以小 写表示）:ataagcccgaaaggttcgtt，另一条就是tttacggatcggcaacctat。 把这两段引物和ＤＮＡ模板、ＤＮＡ聚合酶、底物（四种脱氧核苷）混合 在一起，我们就可以开始做ＰＣＲ了。
