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流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群
作者:未知 来源:网络 时间:2007-11-11

    5 流式细胞术检测小鼠外周血Th1和Th2细胞。分离外周血单个核细胞,加入100ng/ml PMA和1µg/ml 离子霉素刺激5h后,收集细胞。将细胞分为两份,称为对照管和实验管,加入CD4-CYC 10µl,混匀,其余步骤同人的检测。调节仪器的补偿,采用Cellquest软件获取分析细胞。以前向角(FSC)和侧向角(SSC)散射光散点图设门区分淋巴细胞,以CD4直方图设门区分Th细胞(CD4+),以IFN-γ和IL-4的散点图表示Th1细胞和Th2细胞。

    结果
     
    1 不同浓度的PMA对人外周血T淋巴细胞抗原表达的影响。10ng、20ng和50ng的PMA刺激后4h,CD4的表达明显下降,已经不能区分出CD4阳性T淋巴细胞,而CD8和CD3的表达未受明显影响。重复5次检测,典型的检测结果见图1。

    图1 10ng、20ng、50ng PMA和500ng/ml Ionomycin共同刺激4h后人外周血T淋巴细胞CD4、CD8和CD3的表达。
    图中A、B、C系列分别是10ng、20ng、50ng PMA刺激后CD4、CD8和CD3的表达。各种浓度的PMA刺激后均不能有效的区分CD4阴性和CD4阳性细胞,而CD3和CD8的表达受影响很小,可以有效的区分阴性和阳性细胞。

    2 不同时间的PMA刺激对小鼠外周血T淋巴细胞抗原表达的影响。PMA刺激8h后CD4阳性T淋巴细胞的表达没有明显下降。PMA刺激12h后,CD4阳性T淋巴细胞的表达明显下降。而CD8表达在8h和12h均没有明显下降。典型的检测结果见图2。

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