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BIACORE3000生物分子相互作用分析仪操作手册
作者:佚名 来源:中科大 时间:2007-8-2


    传感器芯片
    传感器芯片是实时信号的传导载体。芯片是在玻璃片上覆盖了一层金膜,在金膜的表面连有不同的多聚物以形成不同的表面环境,以利于固定不同性质的生物分子。每个芯片表面有4个通道(FC),可以独立做4个不同的实验,也可以做实时的对照实验。

    SPR光学检测系统
    BIA技术是基于一种表面等离子共振(SPR)的物理光学现象的生物传感分析技术。不必使用荧光标记和同位素标记,从而保持了生物分子的天然活性。当入射光以临界角入射到两种不同透明介质的界面时将产生全反射,且反射光强度在各个角度上都应相同,但若在介质表面镀上一层金属薄膜后,由于入射光可以引起金属中自由电子的共振,从而导致反射光在一定的角度内大大减弱,其中使反射光完全消失的角度称为共振角。共振角会随金属薄膜表面通过的液相的折射率的改变而改变,折射率的变化(RU)又和结合在金属表面的大分子质量称正比。因此,BIA技术可以通过对反应全过程中各种分子反射光的吸收获得初始的数据,并经相关处理获得结果-传感图。

    微射流卡盘
    微射流卡盘是一个液体传送系统,通过软件的控制自动地传送一定体积的样品至传感器芯片表面的不同通道。甚至自动进行样品的回收。
    今天对生命科学奥秘的探索,已经不仅仅停留在是什么,而是要探询为什么。旨在揭示生命现象背后的机理研究,必然要理清生物分子间复杂的关系。只有Biacore能实时反映生物分子相互作用的整个过程,而不同于其他只能提供生物分子作用后的结果的方法,为您开辟一个崭新的研究角度。
    BIA目前应用的领域有:
    -蛋白质组学研究(Proteomics)
    -癌症研究(CancerResearch)
    -新药研发(DrugDiscovery)
    -信号传递(CellSignalling)
    -多分子复合物的结构和组装(Multi-molecularComplexes)
    -分子识别(MolecularRecognition)
    -免疫调节(ImmuneRegulation)
    -免疫测定法(Immunoassay)
    -疫苗开发(VaccineDevelopment)
    -瞬时结合(TransientBinding)
    -配体垂钓(LigandFishing)
    -结合特异性(BindingSpecificity)
    -结构与功能的关系(Structure-functionRelationship)
    -酶反应(EnzymeReaction)
    样品类型
    小分子化合物、多肽、蛋白质、寡核苷酸、寡聚糖、类脂、噬菌体、病毒和细胞

    操作流程
    一、样品准备样品包括耦联到芯片表面的分子(ligand)和在溶液中流过的样品,称作analyte。如果ligand是小分子,要检查该分子结构上是否有可供耦联的俄基团,如果没有需要考虑对分子进行修饰。
    二、缓冲液准备该实验要求所有缓冲液都经过过滤和脱气处理。如果缓冲液能够耐受高温的话,可以对缓冲液进行灭菌处理。这样灭菌有脱气的效果,同时也能保存更长的时间。
    三、耦联参照耦联的具体方法。
    四、测试将分析物用合适的缓冲液稀释处理,上样。要尽可能让样品缓冲液与系统载流缓冲液一致,
    五、再生再生是指将结合到芯片表面的分析物洗脱掉,以便芯片的重复使用。

    日常维护
    1、每周要进行一次DESORB
    2、缓冲液要每天检查,脱气处理;

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