四、实验步骤
1、preconcentration（预结合试验）
由于芯片表面带有负电，因此要偶联到芯片上的分子必须带上正电，才有利于分子吸附到芯片表面，以利于共价偶联反应的完成。预结合实验就是将样品溶解在不同PH值的缓冲液中，使其带上不同量的电荷。然后，将样品流过芯片表面，观察它与芯片的结合曲线，就可判断出合适的条件。如下图：两种不同条件下的吸附实验，第一个峰表明在该条件下，吸附很快达到饱和，这样吸附的量有限，第二种一直呈上升趋势，有利于在芯片上偶联较多的蛋白。实际工作中，还会碰到各种不同的吸附曲线，需要根据实际情况来判断最佳条件。
将抗体用不同PH值得buffer稀释10－40倍，以5μl/min的流速流过芯片表面，观察抗体与芯片的吸附结果。
2、偶联 a)取100μlNHS和100微升EDC混合，12000rpm离心5分钟；
b)取一定体积的偶联蛋白，按预结合的比例稀释，稀释后需要150μl，取100μlethanolamineHCL。以上试剂平衡到室温25摄氏度左右，高速离心五分钟；
c)将上述三种试剂放在样品架上，设定加样流速为10μl/min，inject方式进样，NHS/EDC,样品，ethanolamine-HCl分别上样100，100，和60μl。
d)结束即可得到类似下图的曲线。
3、结合 将抗原用合适的缓冲液稀释成适当浓度，离心后上样，观察抗原抗体结合过程。
如果需要测量不同条件下的结合状况，可以在一次进样结束之后，对芯片进行再生。然后再上下一个样品。
4、芯片再生
抗原抗体结合的再生条件比较简单，简单地用PH2.5的10mMglycine冲洗就可以了。但实际工作中，如果偶联的是蛋白，往往情况要复杂得多。首先,再生条件要能将结合物从芯片上去掉，其次不能让结合在芯片上的蛋白变性失活。因为，万一所选条件使芯片上偶联的蛋白失活，这个通道就意味着报废。所以，芯片的再生是所有用户面临的一个比较头疼的问题。芯片再生要求再生之后，不仅要求基线要能回复到初始值，还要求再上相同的样品，结合能力不会出现明显下降。
5、如果需要得到结合与解离的动力学常数，至少需要进行五组不同浓度的结合实验。
6、分析实验结果，打印实验报告。
7、仪器维护，实验完毕，runningbuffer换成过滤并脱气的超纯水或HES－EP缓冲液。芯片更换为维护芯片，进行至少两遍prime后，运行standby。
8、收拾整理实验场所。
附录
BIAcore3000生物分子相互作用分析仪
BIAcore系统的3个核心部分是传感器芯片，SPR光学检测系统，微射流卡盘。
