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PFGE(脉冲场凝胶电泳)标准操作规程(SOP)
作者:未知 来源:国家CDC科室培训资料 时间:2007-7-15

    6、SeaKem Gold Agarose
    -做胶块; -电泳胶
    报价 seakem gold 琼脂糖 25g 货号50111,1567元人民币。可打9折。
    125g 货号 50150 ,BMA, 6422元。
    北京基因公司 10-66001657;上海 021-64951899;广州 020-85524840;020-85524841
    天津 022—23011926;西安 029-2501171;成都 028-85228747;沈阳 024-23341315
    济南 0531-6560825;武汉 027-87660490;昆明 0871-5199992;杭州 0571-87229824
    长沙 0731-2222682;重庆 023-68614842;南京 025-3248693

    7、无菌的超纯水
    8、蛋白酶K粉末或蛋白酶K溶液(20mg/ml)
    6、限制性内切酶
    E. coli O157:H7, Salmonella, Shigella sonnei
    -XbaI,,AvrII (同切限制内切酶BlnI),SpeI
    (NotI可用于S. sonnei;但不用于E. coli O157:H7)
    L. monocytogenes,-AscI, ApaI
    Campylobacter jejuni, C. coli,-SmaI, KpnI
    器 材
    1、Dade Microscan Turbidity Meter
    Spectrophotometer
    bioMérieux Vitek Colorimeter
    -调整细胞悬浊液的浓度
    2、微波炉-溶胶
    3、水浴摇床
    -裂解胶块中的细胞(54℃)
    -用水和TE(50℃)洗胶块
    4、56℃水浴箱-平衡和保温熔化的胶
    5、25℃, 30℃, 37℃水浴箱-酶切
    6、50℃水浴箱-加热用于洗胶块的水和TE,酶切
    7、离心机。
    8、最少需要两个水浴箱-一个平衡到56℃,另一个到37℃。如果需要,温度可以上下调动。Listeria PFGE中胶块的ApaI酶切需30℃水浴。
    耗 材
    1、无菌的Falcon 2054(12-mm x 75-mm)或Falcon 2057(17-mm x 100-mm)-用于细胞悬浊液的制备
    基因公司代理 ,
    2、无菌的聚酯纤维或棉签-用于从琼脂平板上刮取细菌
    3、无菌的枪头或巴斯得吸管
    4、无菌的1.5 ml离心管-用于混合细胞悬浊液和胶、酶切
    5、无菌的50 ml screw-cap tubes 或50 ml Oak Ridge tubes -用于装胶块,
    6、Green Screened Caps(Bio-Rad 1703711)-洗胶块时用伯乐公司 货号 170-3711。
    7、模具
    -10孔(可重复利用的,2cm x 1cm x 1.5mm)
    -50孔(一次性的,1.5mm x 10mm x 5mm)
    8、单刃剃须刀、手术刀、平皿或类似物-用于切胶块
    9、无菌的一次性皮氏平皿或大的玻璃载物片-用于切胶块
    10、一端宽、一端窄的平铲
    药铲,生工等公司的实验室耗材部分有。
    11、标准胶槽(14 x 13cm的框和平板)
    12、10孔的梳子(14 cm长,1.5 mm宽)
    13、15孔的梳子(21 cm长,1.5 mm宽)-Bio-Rad 170-3627
    14、胶水平台
    15、盛放EB染液的塑料容器
    16、70%异丙醇、5%-10%的漂白剂或其它合适的消毒剂
    17、各种体积的无菌烧瓶或瓶子(50 ml - 2000 ml)
    18、各种规格的无菌量筒(100 ml - 2000 ml)
    19、无菌的吸管(2 ml - 50 ml)
    20、保护性手套(无石化粉的乳胶手套、聚乙烯手套或腈类手套)
    21、防热性手套
    22、冰盒

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