目的：运用PFGE方法对20Kb至数Mb的DNA进行分子分型
背景知识：这个试验是公认的操作繁琐，至少要2天，而且每一步操作对结果的好坏都有很大影响，因此，一个严格、标准的操作方法是十分十分必要的。
主体内容：
一、胶块的制备
1、在Falcon 2054管上标记样品名称和空白对照，分别加入约2ml细胞悬
浊液(CSB)；
2、在1.5ml eppendorf管上标记好对应样品的名称；
3、在模具上标记好对应样品的名称；
4、用CSB湿润接种环，从培养皿上刮取适量细菌，均匀悬浊于CSB中，
用bioMerieux Vitek colorimeter测其OD值，并调整至3.6~4.5。如果OD值大于4.5，加入CSB稀释；如果OD值小于3.6，增加菌量提高其浓度。
5、取400µl细菌悬浊液于相应的1.5ml eppendorf管中，置于37℃水浴中孵
育5分钟。将剩余的细菌悬浊液置于冰上直到胶块制备好放在水浴摇床中。
6、从水浴箱中取出eppendorf管，每管加入20µl蛋白酶K(储存液浓度为
20mg/ml)混匀，使其终浓度为0.5mg/ml。
7、制备好1%Seakem Gold：1%SDS，放于56℃水浴箱中。
8、在eppendorf管中加入400µl的1% Seakem Gold：1%SDS，用枪头轻轻
混匀。
9、将混合物加入模具，避免气泡产生，在室温下凝固10-15分钟。
注意事项：
(1)用后的接种环要放在指定的废弃物容器中。
(2)细胞悬浊液、蛋白酶K要置于冰上。
(3)在混合细胞悬浊液和1% Seakem Gold：1%SDS时要避免气泡的产生。
(4)混合物加入模具时不能产生气泡。
(5)在加1% Seakem Gold：1%SDS的过程中1% Seakem Gold：1%SDS要一直放在56℃水浴箱中。
二、细胞的裂解
1、在50ml的screw-cap tube上做好标记。
2、配制细胞裂解液(CLB)：每5ml细胞裂解液加入25µl蛋白酶 K(20mg/ml)，使其终浓度为0.1mg/ml，然后颠倒混匀。
注意：蛋白酶K要置于冰上，配制好的细胞CLB也要置于冰上。
3、每个管子加入5ml蛋白酶K/CLB混合液。
4、如果想使胶块平齐，可以用刀片削去模具表面多余的部分。
(1)可重复利用的模具：打开模具，用小铲的宽头部分将胶块移入相应的screw-cap管中。
(2)一次性模具：撕掉模具下面的胶带，用小铲将胶块捅进相应的screw-cap管中，将模具、胶带、小铲放入废弃物容器中。
5、保证胶块在液面下而不在管壁上。
6、将管子放在54℃水浴摇床中孵育2小时，转速约170转/分钟。
7、将纯水和TE放在50℃水浴摇床中预热。
三、洗胶块
1、从水浴摇床中拿出screw-cap管，盖上绿色的screened-cap。轻轻倒掉
CLB。在实验台上轻磕管底使胶块落在管底。
注意：
把管倒置在吸水纸上，使管内液体被尽量排除干净。随后的操作中也如此。
2、每管中加入15ml预热的纯水。
3、确保胶块在液面下而不在管壁或盖子上，放回50℃水浴摇床中，摇10分钟。
4、倒掉水，用纯水再洗一次。、
5、倒掉水，加入15ml预热的TE，在50℃的水浴摇床中摇15分钟。
6、倒掉TE，用TE重复洗三次，每次10－15分钟。
7、倒掉TE，加入10ml TE，放在4℃冰箱保存备用。
注意：要确保胶块在液面下而不在管壁或盖子上。
