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P230高效液相色谱仪系统使用维护保养及清洁标准操作规程
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2007-7-10

    1.目的
    建立一个大连依利特P230高效液相色谱仪的使用、维护保养标准操作程序,使操作过程标准化。
    2.职责
    质量部QC负责本文件的起草,质量部及QC检验人员负责本标准的实施。
    3.范围
        本标准适用于大连依利特P230高效液相色谱仪的使用、维护和保养。
    4.内容
    4.1. 仪器组件、型号
    4.1.1. 仪器组成:P230高压输液泵、UV230紫外-可见检测器、EC2000色谱工作站。
    4.1.2  电源:220V稳压电源。
    4.2. 操作步骤
    4.2.1. 流动相的配制
    4.2.1.1. 根据各药品项下规定的配制方法,配制各种单项溶液,用微孔滤膜(φ0.45μm)单向抽滤。纯化水系溶液用水膜过滤,有机溶剂(或混合溶剂)用油膜过滤。
    4.2.1.2. 脱气:配好的流动相需要洗脱排气泡。方法:用超声波清洗器清洗排气泡,时间约10~20分钟。
    4.2.2. 开机
    4.2.2.1. 打开电源,待电压稳定后,依次打开“高压输液泵”电源、检测器电源和工作站。
    4.2.2.2. 稳定柱压:换上流动相,开始下列操作: 清洗、调流速。
    调流速:根据检品要求调“流速”,未明确“流速”的检品,调流速使柱压在适宜范围内(不得超过40MPa)。
    具体操作:按“△”“▽”键,屏幕显示 “MENU1”后按“△”或“▽”输入数字至所需流速和最高和最低压力,再按“确认”键。然后启动泵看压力是否超过范围。
    4.2.2.3. 调波长:根据检品要求调“波长”。方法:打开“检测器”电源,按“操作菜单”键,屏幕显示 “MENU1”后按“△”或“▽”键进行波长设定,设定是按数字键后按 “确认”。
    4.2.3. 打开分析文件
    4.2.3.1. 设置分析方法:根据检品所需设置分析方法(或直接调出本检品已保存的方法)等待进样。
    4.2.3.2. 进样:用仪器配备的进样器,或用一次性注射器(规格1ml,管径较细的好用),吸取一定量的待检液(不少于20ul。因进样器定量环自动控制在20ul。),自进样器注入进样阀,快速扳动进样阀手柄,即开始分离,同时启动数据采集。
    注意(1):进样前基线要走平稳,且检测器已预热半个小时。
    4.2.3.3.进样顺序:首先插针到进样阀的底部,后逆时针旋转到底,进样品后迅速顺时针旋转到底,然后拔出进样针。
    4.2.3.4.等样品分析完毕后基线平稳,方能结束数据采集。
    4.2.3.5、分析结果: 等到所设的时间结束后自动分析。
    4.2.3.6、打印结果:点“报告”项下的打印信息设置选项,进行信息设置后.点击“文件”菜单先预览,再打印。
    4.2.4. 实验完毕后的处理工作
    4.2.4.1. 关闭计算机和检测器:实验完毕及时关闭检测器(便于保护检测器,甚至可延长检测器的寿命);根据提示依次关闭桌面,最后关闭工作站.恒流泵和柱温箱。
    4.2.4.2. 每次操作完毕后,应及时清理所用物品,废液倒到废液容器内,所用的玻璃仪器及时送到洗刷池。实验台面、仪器表面用柔软的抹布擦拭干净,时刻保持实验台和仪器的整洁。
    4.2.5  冲洗
    4.2.5.1. 进样阀的冲洗:将进样针插入进样器,先用流动相或样品的溶剂,3~5次,再用甲醇冲洗,3~5次;再旋动进样阀按上法冲洗,3~5次;最后把进样器上的进样针拔掉,安上配备的冲洗头(白色的圆形配件)用甲醇冲洗3~5次,即可。将进样针插到进样器上保存,盖好红色保护盖。
    4.2.5.2.色谱柱的冲洗
    (a)含盐的流动相的冲洗方法:每天操作结束后,先用纯化水或含甲醇5%(最高浓度在20%以下)的水冲洗时间约20~30分钟。再用高浓度甲醇(含甲醇85%以上)溶液冲洗,约30~60分钟(注:不能直接用有机溶剂冲洗,盐类易析出,堵塞色谱柱,造成色谱柱永久性损坏;所用水最好是重蒸馏的水。必须抽滤和脱气)。
    (b)不含盐的流动相的冲洗方法:每天操作结束后,先用流动相冲洗约10~15分钟,再用含5%甲醇的水冲洗10~20分钟。最后用高浓度甲醇(含甲醇85%以上)溶液或纯甲醇冲洗,时间约20~30分钟(注:不能直接用纯水冲洗,易造成流动停止。所用水最好是重蒸馏的水。必须抽滤和脱气)。
    4.2.6. 注意事项
    4.2.6.1. 流动相或单项溶剂需经过0.45μm的微孔滤膜过滤(色谱纯的有机溶剂可以不用过滤),以降低色谱柱受污染的程度,延长使用寿命。抽滤流动相或单项溶剂时,应注意滤膜的选择:抽滤纯水或纯水溶液时,选用水系滤膜,抽滤分析纯有机溶剂或混合溶液中含有有机溶剂,要选用脂(F)滤膜。
    4.2.6.2. 若仪器长时间不用,可定期加电,使仪器预热一段时间,以免仪器内部件受潮。
    4.2.6.3. 根据需要设定参数。由于每根色谱柱性能、填料各不相同,要依据其特性控制压力,防止压力过大导致柱内填料空间发生变化,影响分离效果。以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱一般最高工作压力不能超过40 MPa。
    4.2.6.4. 最后一次进样完成后,应用流动相冲洗一段时间,以保证洗脱完全,然后照4.2.5.2操作。
    4.2.6.5. 最后根据色谱柱的填料不同,采用不同的溶剂,保存色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱宜用甲醇再生保存。

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