高效液相色谱法按分离机制的不同分为：
液固吸附色谱法
液液分配色谱法（正相与反相）
离子交换色谱法
离子对色谱法
分子排阻色谱法
1.液固色谱法 使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μm。适用于分离分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异构体。
2.液液色谱法 使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。
正相色谱法 采用极性固定相，流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
反相色谱法 一般用非极性固定相，流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。
3.离子交换色谱法 固定相是离子交换树脂，缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。
4.离子对色谱法 离子对色谱法常用ODS柱（即C18），流动相为甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10 mmol/L的离子对试剂，在一定的pH值范围内进行分离。
5.排阻色谱法 固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。
四、实例应用：高效液相色谱法测定面粉中荧光增白剂
荧光增白剂是卫生部严令禁止在食品中添加的制癌性物质。对混在面粉、面粉改良剂、面粉快速发酵粉等和食品添加剂中的检验、国家有定性及限量方法，但操作复杂，耗时长，为此，我们建立了简便、快捷、灵敏度较好的高效液相色谱法
1.2 试剂：1 荧光增白剂标准液33号0.1g，加水溶解，定容至100mL，（含荧光增白剂1.0mg/ml）2 棕色瓶中保存使用时吸取上述标准溶液10 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度（相当于0.1 mg/ml荧光增白剂）3 甲醇
1.3 仪器条件：流动相100%甲醇，测定波长365nm；流速灵敏度1.0AUFS
1.4 操作步骤
提取：将样品粉碎，称取5.0-10.0g于具塞三角瓶中，加50ml水，电动振荡器振荡30分钟后，调节pH至中性，定容至100ml;，抽滤，弃去初滤液10ml，剩余滤液再经微孔膜(0.45μ)过滤，滤液待用。
测定：分别取标准溶液及样品提取液注入高效液相色谱，进行色谱分析，根据保留时间及峰面积定性、定量。
现代的色谱分析方法在分离效率、分离和分析有机结合操作过程的自动化方面作了很大的改进。其中包括气相色谱法和高效液相色谱法两大类，它们已成为分离分析工作中最重要的方法。
