1.5 空间排阻色谱
Kato 等曾通过丁醚或三乙醇苯醚与TSK G3000 SW 空间排阻色谱法 (SEC) 结合合成 HIC 固定相材料，当使用盐溶液梯度洗脱时，可达到很高的分离度。一些极性键合相通过分配比调节的排阻色谱分离蛋白质和多肽。Miller 等报道过用醚相结构合成大孔硅胶填料：Si-(CH2)3-O-(CH2CH2O)n-R;n=1,2或3;R=Me,Et或n-Bu。用这种填料制得的色谱柱可至少连续使用五个月其保留值不变。
烷基链长度和配体密度能直接影响到保留值与分离度，而使用低配位数密度基质更易再生，不易变性，对分离大多数蛋白质来说，基质微球直径在300? 时具有最强的再生力，直径小到1mm的多孔微粒填入1cm 的色谱柱中对于蛋白质的分离十分有用。另一改进色谱有效途径是使用非多孔微球(1-3mm)， 柱长约30mm，柱效稳定，当小心控制流动相温度和所有仪器组成时，柱外效应很小，曾有人通过洗脱法在2分钟内分离6种蛋白质的混合物。
Smigol[7] 论述了均相聚合甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚乙烯二甲基丙烯酸酯微球用特殊化功能的多孔介质制得二醇或二乙胺相有较大孔隙和十八烷基官能团有较少孔隙，这样制得的一种基质当所有分子接近极性相时，较少的分子进入多孔介质，而限制了大分子进入到十八烷基键合相中。
总之，不论是何种类型的固定相对于手性异构体的拆分以及蛋白质和多肽大分子的分离仍在不断的探索完善之中，从发展的趋势看，寻求各种高分子材料作为新型色谱固定相前景光明。
2 液相色谱流动相
液相色谱应用广泛的是反相色谱，其流动相的优化组合直接关系到分离效果。八十年代二元流动相组成优化依赖于容量因子(k’)的对数值与极性溶剂的摩尔分数关系，根据两者线性关系，可以估算溶质的保留值。曾有人确定过14种二元溶剂系统的容量因子与流动相的关系。
Scott,Snyder和Soczeuinski的色谱模型被应用于分离烷基酚和萘酚，使用m Bondapak NH2 固定相，Nurok和 Richard建立了一个简单的方程来确定溶剂组成的优化，这种方法既可以用于TLC也可以用于HPLC。六种等离子强度溶剂的结合被应用于产生六种三元流动相，用于分离大范围的化合物，这些混合物的极性通过增加极性溶剂来调节。Zima和Smolkova报道过在碳吸附剂上氨基酸保留值的酸碱效应及离子强度，并且给出一系列方程式预言这些两性电解质的保留行为。
Markl曾将有机磷和硫加入到流动相中可以调整硅胶表面，这些化合物吸附在硅胶表面由于氢键作用而改变了选择性和溶质的保留值。 Hitachi化学公司用于二甲基乙烯酰胺和二甲基聚丙烯酰胺流动相用无机酸调节PH 2 -6来分析PI2550使用二乙烯苯—苯乙烯作填料，曾获得专利。Cole和Dorsey研究过在反相分离梯度洗脱过程中二次平衡保留时间问题，他们发现当加入3％1-丙醇到强溶剂和弱溶剂中去时，二次平衡时间大大缩短。在反相分离过程中，曾有人作过三种研究关于分配过程中热力学驱动力。Sentell和Henderson研究过C18 相作为温度和键合密度形状选择性并且发现低于室温和高键合密度固定相可获得较好的选择性，他们建立了范德荷夫座标图并且指出作为一种功能键合密度图形的差异。
Gheong和Carr曾使用对于烷基苯在水和4种最普通的有机混合溶剂的一系列无限稀溶液的活度系数的混合物中，观测其保留过程。他们注意到非极性溶质在饱和的十六烷甲醇溶液中和在纯十六烷溶液中测得的活度系数稍微不同，表面积对键合的体积比率在键合相色谱中至关重要。
Park等曾利用Kamlet-Tafl溶剂化色谱图途径来研究保留过程，他们测得氢键给体对甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和四氢呋喃的水溶液的混合物的酸度进而研究单取代酚基于溶剂能量线性关系的保留值。聚合芳香烃的使用作为一种探测保留过程，尤其是对于相关的选择性引起人们浓厚兴趣。这些研究很成功，国际标准和技术协会已公布过这种标准参考材料作为评价反相柱的选择性，其中有两种观点，Sander和Wise[8] 发表过杰出的论文论述选择性及其评价这种性质途径。Hoffman和Chang报道过一些溶质溶解在弱极性溶剂中再注射到强极性流动相时峰高和塔板数的增加，vukamanic 等注意到进样溶剂的选择能影响峰的完整性，包括产生裂峰和激变峰。已有各种各样的途径研究保留值和选择性。
有人曾连续使用同系物摸索选择性，其它选择性特征化的方法包括主要成分的分析和利用置换机理对于溶剂的模型吸附到键合相中热力学处理。Kowalska 也利用甲醇—水流动相调整溶质保留值，Kaibara等人则研究过反相固定相同溶质的反应，也有人[9]尝试过利用UNIFAC 法评价保留值，p－p 键反应的作用，用不同的三元溶剂系统计算等强度的流动相，用溶质和流动相分配系数描述溶质保留值，用体积特性参数如粘度、介电常数等关系反相保留值，还有用信息理论和“负熵”描述保留行为。Skelly等开发计算机辅助选择内标物，可从90种内标物的数据库中依据保留时间的排列次序择其所用。
