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色谱常见十四种使用问题的详细解答
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2007-6-30

    问:做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在?如何解决?
    答:原因可能有:
    1、泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理;
    2、比例阀失效,更换比例阀即可。
    3、泵密封垫损坏,更换密封垫即可。
    4、溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法;
    5、系统检漏,找出漏点,密封即可。
    6、梯度洗脱,这时压力波动是正常的。
    问:做PGS/MS分析时,如何防止焦油状污染物进入毛细柱?
    答:聚合物,尤其是一些含氮、硫及卤素的高分子裂解时,常有焦油状物质产生。为防止这种焦油状物质进入毛细柱造成污染
    而使柱性能下降,可采用保护预柱,即在裂解器与毛细柱之间接一填充预柱,通过控制预柱温度而使焦油状物质滞留在预柱内
    ,预注可置于GC气化室内,这样既容易控制温度,又减少系统的死体积,当然,预柱填料需经常更换。
    问:我最近更换了另一种牌号的ODS柱,虽然分离情况仍可以,但保留时间不能重现,为什么?
    答:这是因为被分析物可能具有形成氢健的能力。尽管过去几年来,填料的制造技术有了极大的提高,但不同的厂商的ODS填料
    表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此,同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相
    对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物,如三乙基胺(TEA),将会使硅醇基的成键能力饱和,从而保证不同牌号柱
    子上的相对保留时间具有较好的重现性。
    问:我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高,请问为什么?
    答:柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的
    起因。
    1、拆去保护柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查;
    2、把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查。
    3、将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动性 )。这时,如果柱压仍不下降,再检查;
    4、更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压
    还高,请与厂商联系。一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题,SGE提供的Rheodyne
    7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
    问:高温毛细柱的使用寿命一般为多长?
    答:毛细柱寿命除决定于柱子本身的性能外,在很大程度上取决于使用情况,比如使用温度、样品状态,进样量等,如果在其
    使用温度范围内,样品干净,色谱柱不被污染的情况下,柱子寿命一般在2—3年之间。
    问:如毛细管柱被污染,柱效和分辨率降低,有何方法使它恢复?是否可通过老化来解决?
    答:根据柱污染程度可采取不同的方法来解决,如果污染不严重,污染物沸点不是太高,可通过老化来解决,但老化温度不可
    超过柱子的最高使用温度,且一般要较长时间(8—30小时),如果污染较严重,或通过老化仍不能使柱性能恢复,那就必须采用
    溶剂清洗,通常是用5倍柱容积的溶剂(如正戊烷,二氯甲烷等)通过色谱柱。当然,清洗溶剂用的越多,对柱性能的损坏越大,
    清洗完后,在通载气老化一定时间,如果柱性能恢复,便可继续使用。必须指出:只有交联柱才能清洗,对于非交联柱,清洗
    柱会彻底失效,因为固定液被洗掉了,至于清洗用溶剂的选择,可参考说明书。
    问:BPX70毛细管柱是否可用于GC/MS分析?
    答:完全可以,BPX70为极性柱,使用温度范围宽(25—260℃),程序升温可达290℃,流失低,适合于分析脂肪酸甲酯的各种位
    置和几何异构体,药物异构体,碳水化合物等。因BPX70为交联住,故用于GC/MS很稳定,污染后可清洗再生。

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