4．工作距离
工作距离是指观察标本最清晰时，物镜透镜的下表面与标本之间（无盖玻片时）或与盖玻片之间的距离。物镜的放大倍数越大，其工作距离越短，油镜的工作距离最短、约为0.2mm，所以使用油镜时，要求盖玻片的厚度为0.17mm。虽然不同放大倍数的物镜工作距离不同，但生产厂家已进行校正，使不同放大倍数物镜转换时，都能观察到标本，只需进行细调焦便可使物象清晰。
5．目镜的放大倍数
据计算，显微镜的有效放大倍数是：
E×O＝1000×NA
E 为目镜放大倍数，O 为物镜放大倍数
目镜的有效放大倍数是：E＝1000NA／O
据上式可知，在与物镜的组合中，目镜有效的放大倍数是有限的，过大的目镜放大倍数并不能提高显微镜的分辨率。如用90×，NA 为1.4 的物镜，目镜有效的最大倍数是15×。
（二）相差显微镜的使用方法
相差显微镜与普通显微镜本相同，只是在普通显微镜上附加光阑和相板等相差滤光装1、环状光阑：是由环状圆孔构成的光阑，大小不同的环状光阑成一转盘，安装于聚光镜下面。更换放大率不同的物镜时，要同时更换与其适应的光阑。
2、相板：装于物镜的后焦平面，有推迟直射光和衍射光相位，以及吸收光线收变亮度的作用。带有相板的物镜，称为相差物镜。
3、合轴调整望远镜：为使环状光阑的中心与物镜的光轴完全在一直线上，必须拔出目镜，装上特制的低倍望远镜，使相板的暗环与环状光阑的明环合轴。
其使用方法是在普通光学显微镜上换上相差聚光器和相差物镜，将用水封载的玻片标本放在载物台上，转动相聚光器，使与物镜的开口率或放大倍数相一致，镜检见物像。取下目镜，换上合轴调整望远镜，伸缩望远镜筒，使看清物镜相板上暗环和环状光阑上的亮环；移动彩虹光圈，使暗环和亮环圆心重合；升降聚光器，使两环完全重合，即在亮环内外侧看到暗的边缘。取下望远镜，换上补偿目镜进行镜检。镜检时只能以微动螺旋调焦而不能转动聚光器，否则需重新进行合轴调整。更换物镜时也要重新进行合轴调整，然后才能观察。相差显微术需用水作封载剂并加盖玻片。载玻片和盖玻片厚度分别为1.0-1.2、0.17-0.18毫米，清洁无损。
三、实验材料
（一）仪器和其他物品
普通光学显微镜、液体石蜡或香柏油
（二）微生物材料
枯草芽孢杆菌的染色标本
四、实验内容
显微镜的使用方法。
（一）显微镜的放置
显微镜应直立放置在案上
（二）光源
显微镜不能采用直射阳光。晴天可用近窗的散射光作光源。也可用日光灯作为光源。而专为显微镜照明而制造的聚丝电灯是较好的光源。
在接通电源后，取下目镜，直接向镜筒内观察，并调节聚光镜上的孔径光阑，使其孔径与视野恰好一样大或略小于视野，其目的是使入射光展开的角度与物镜的数值口径（开口率NA）相一致，既可充分发挥该物镜的分辨力，又能把超过该物镜可能接受的多余光挡住，否则能产生干扰．影响清晰度。所以，原则上使用不同的物镜时应相应调节孔径光阑。放回目镜后，通过调节聚光器上的视光阑或调节照明度控制钮，选择最佳的照明效果。
