(2)另一类是空气加热。用空气做介质有优点，与反应体系无缝接触，但是空气的导热性差、比热小的弱点也很明显。
Roche罗氏诊断主推LightCycler和LightCycler2．0 2种荧光定量PCR仪。2oo5年7月份正在全新推出新一代高通量的LightCycler® 480 system。LightCycler2．0已由LightCycler的3个荧光检测通道升级为6个荧光检测通道，独特的离心、空气加热、毛细管等设计，使其成为很有特色的PCR仪。空气加热通过离心使空气流动，增强导热性，同时使用毛细管，加大接触面积、试剂微量化来弥补不足。加样量的多少对于反应的结果是有影响的，加样量越大，空气比热小的弱点就越明显，所以空气加热的仪器标本量都比较小。使用毛细吸管，试剂的专一性高，通用性差。LightCycler®480是一款针对高通量实验需要而设计开发的创新一代96/384互换式实
时荧光定量系统，秉承了LightCycler系列一贯的高速、准确的特质，采用革新的Therma—BaseTM模块加热技术和独特快速散热装置，确保了孑L间温度的均一性；同时匹配以先进光学检测系统，确保信号的整体采集和检测灵敏度最大化，消除了传统模块加热式系统中的“边界效应”；具有5个激发光道。6个检测通道。
Corbett的Roar—Gene也是离心式、空气加热的定量PCR仪。Corbett的Rotor-Gene3000标准型是真正独立的4通道(可建立新通道)，4个独立LED激发光源(470rim/530nm/585nm/625nm)，保证最少的光谱交叉(<1％)。PMT检测，6个检测滤光片，可检测荧光包括FAM/SYBR Green I、TET、VIC/JOE、HEX、Max、NED/TAMRA/Cy3、ROX/Texas Red和Cy5，Cy5．5等，机器的适用性非常宽，开放的试剂系统使得机器可适用Taqman探针、荧光染料SYBR Green I检测、分子信标、FRET探针等。Rotor-Gene3000灵敏度高，宽达12个数量级的线性范围，可正确区分1、2、3个拷贝的基因，重复性极佳(R>0．99935)。由于转子在反应过程之中一直以恒定的低速旋转，使得样品间的温度均一性极佳，同一热反应室提供完全相同的反应条件，同一光学通路提供完全相同的测量通道，每标本每循环检测32次，满足高精度和一致性要求。Rotor-Gene3000提供了36x0．2ml和72x0．1ml 2种转子，检测是通过薄壁管侧壁而非管底进行的，因而可以使用普通的0．2ml PCR管，并允许在试管盖上标记，这降低了使用成本。Rotor—Gene3000的温控速度不如Light．Cycler，但优于多数的固定加热模块的机型，能达到5℃，8(管内实际升温速度达到2．5℃/s)。Corbett还有一个光学变性专
利——让待扩增样品预先进行一次熔解曲线程序，检测荧光染料信号大小的变化，找到代表全部双链DNA解链的峰值对应温度，在其后的反应中就无需总是将变性温度设为94。，也不需要延长孵育时间。这个专利使得反应过程大大缩短。Rotor-Gene主要的问题也是可容纳的样品数量少，只能靠反应速度快，同样的时间可以多运行几轮反应来弥补。
2 选购PCR仪的关键因素
除了PCR仪的性能外，仍有一些关键因素是不能被忽视的，主要有：
(1)仪器的检测量。针对不同的实验目的(检测数量的大小，检测时间的长短、检测项目的多少、仪器的多少等)，应配备不同检测量的PCR仪。在上面所述的几种PCR仪中，ABI的Prism®7000、7300和7500；Bio—Rad(伯乐)公司的iCycler iQ；MJ的Opticon、Opticon2和chromo4；Cepheid公司的Smart CycledI可一次容纳96个样品。Corbett的Rotor-Gene3000每次的最大样本数为36(0．2m1)或72(0．1m1)，LightCycler2．0的每次最大样本
数为32个。ABI的Prism® 7900HT，Roehel~LightCyeler~ 480可同时检测96/384个样品，对于需要高通量的实验具有很大的应用价值。
(2)仪器的灵活性。针对多数科研实验室的仪器使用频率高、时间长的问题，仪器的灵活性就显得至关重要。如何能够充分利用人力与物力的问题就摆在了我们面前，此时Cepheid公司的Smart CyclerII不失为明智的选择，其允许不同条件的PCR反应同时进行的优点也就格外突出。
(3)仪器的检测通道。目前，复合PCR实验已成为一种流行趋势，它能节省试剂和时间，在短时间内获得结果。其中罗氏的LightCycler2．0和LightCyclerR480具有6个检测通道，剩下的仪器则以4通道检测的居多。
(4)仪器的温度梯度功能。新的定量PCR实验方法的建立，往往离不开反应条件的优化。梯度PCR可以对解链、退火和延伸均设置温度梯度，使你在摸索实验条件时，将本应进行的多次实验简化为一次，大大缩短实验时间。
(5)耗材、试剂的开放性。耗材、试剂的开放性可显著降低实验成本。上述仪器中，Roche使用的耗材的通用性差，成本高(毛细管)，且每次的检测数量低，在高样品量时，无疑叉增加了阴、阳性样品的费用。
参考文献
1 Higuchi R．Kinetic PCR alysis real-time monitoring of DNA amplification
reactions．Bioteehnology，1993，1 1(9)：1026~1030
