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高效液相色谱仪使用中常见问题及解决方法
作者:黄加龙 来源:生物秀 时间:2006-12-23

    高效液相色谱(High Performance Liquid Chro—matographv.HPLC)是近3O年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离、分析技术。

    它既能用于微量组分的分析测定.又能用于大量的制备分离.灵活多样,应用范嗣已超过其它各种分离方法.高效液相色谱仪在使用过程中常会出现一些影响分析结果的问题.

    如果使用人员了解常见问题及其成因和相关解决方法.就能做到勤维护早预防.使分析结果保持较好的稳定性与较高的精确性

    1 高效液相色谱仪系统
    液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成(见图1)。对于整个系统而言.柱子、泵和检测器是核心部件.同时也是易出问题的主要部位。

    2 常见问题及解决方法
    高效液相色谱仪作为一种高精密仪器.如果在使用过程中操作不当的话.就容易导致一些问题.其中最常见
    的就是柱压问题、漂移问题、峰形异常问题。
    2.1 柱压问题
    柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关 所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值.而是指压力波动范围在345kPa以内(在使用梯度洗脱时。柱压平稳、缓慢的变化是允许的)。压力过高、过低都属于柱压问题。
    2.1.1 压力过高
    这是高效液相色谱仪在使用中最常见的问题.指的是压力突然升高.一般都是由于流路中有堵塞的情况。此时.我们应该分段进行检查。
    ① 首先断开真空泵的人口处.此时PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶.看液体是否自由滴下,如果液体不滴或缓慢滴下.则是溶剂过滤头堵塞处理方法:用3O% 的硝酸浸泡0.5h.在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下.溶剂过滤头正常,再检查。

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