一、原理
当一束单色光照射待测物质的溶液时，当某一定频率（或波长）的可见光所具有的能量（hf）恰好与待测物质分子中的价电子的能级差相适应（即ΔE=E2-E1=hf）时，待测物将对该频率（波长）的可见光产生选择性的吸收。用可见分光光度计可以测量和记录其吸收程度（吸光度）。由于在一定条件下，吸光度A与待测物质的浓度C及吸收地长度l的乘积成正比，即A＝ KCL
所以，在测得吸光度 A后，可采用标准曲线法、比较法以及标准加入法等方法进行定量分析。
二、结构
722型光栅分光光度计的结构
722 型光栅分光光度计，采用自准式色散系统和单光束结构，色散元件为衍射光栅，使用波长为330 一800 nm 数字显示读数还可以直接测定溶液的浓度。其外形如图2－39。
1 数字显示器 2 吸光度调零旋钮 3 选择开关 4 吸光度调斜滤按钮
5浓度旋钮 6 光源室 7 电源开关 8 波长手轮 9 波长刻度板
10 试样架拉手 11 100%T旋钮 12 干燥器
图2－39 722 型分光光度计
三、使用方法
722 型光栅分光光度计的使用方法
（1）操作步骤
①在接通电源前，应对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固，接地线通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源。
②将灵敏度派或调至“1”档（放六倍率最小）。调彼长调节器至所需波长。
③开启电源开关，指示灯亮，选择开关置于“T”，调节透光度“100％”旋钮，使数字显示“100.0”左右，预热20分钟。
④打开吸收地暗室盖（光门自动关闭），调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”，盖上吸收地盖，将参比溶液置于光路，使光电管受光，调节透光度“100％”旋钮，使数字显示为“100.0”。
⑤如果显示不到“100”，则可适当增加电流放大器灵敏度档数，但应尽可能使用低档数，这样仪器将有更高的稳定性。当改变灵敏度后必须按④重新校正“0”和“100”。
⑥按④连续几次调整“00.0”和“100”后，将选择开关置于A，调节吸光度调零旋钮，使数字显示“.000”。然后将待测溶液推入光路，显示值即为待测样品的吸光度值A。
⑦浓度 C 的测量。选择开关由“A”旋至“C”，将标准溶液推入光路，调节浓度旋钮。使得数字显示值为已知标准溶液浓度数值。将待测样品溶液推入光路，即可读出待测样品的浓度值。
⑧如果大幅度改变测试波长时，在调整“00.0”和“100”后稍等片刻（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定后，重新调整“00.0”和“100”即可工作。
（2）注意事项
①使用前，使用者应该首先了解本仪器的结构和原理，以及各个旋或之功能。
②仪器接地要良好，否则显示数字不稳定。
③仪器左侧下角有一只干燥剂筒，应保持其干燥，发现干燥剂变色应立即更新或烘干后再用。
④当仪器停止工作时，切断电源，电源开关同时切断，并罩好仪器。
