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光学显微镜基础知识(历史、原理、结构、分类和使用)
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-8-30

    相衬显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检,也就是有效地利用光的干涉现象,将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差,即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察,因此相衬镜检法广泛应用于倒置显微镜中。 
    相衬镜检法在装置上与明场不同,有一些特殊要求:
    a. 环状光阑(Ring slit): 装在聚光镜的下方,而与聚光镜组合为一体---相衬聚光镜。它是由大a. 小不同的环形光阑装在一圆盘内,外面标有10X、20X、40X、100X等字样,与相对应倍数的物镜配合使用。
    b. 相板(Phase plate): 装在物镜的后焦平面处,它分为两部分,一是通过直射光的部分,为半透明的环状,叫共轭面;另一是通过衍射光的部分,?quot;补偿面"。有相板的物镜称"相衬物镜",外壳上常有"Ph"字样。
    相衬镜检法是一种比较复杂的镜检方法,想要得到好的观察效果,显微镜的调试非常重要。除此之外还应注意以下几个方面:
    a. 光源要强,全部开启孔径光阑;
    b. 使用滤色片,使光波近于单色。
    6. 微分干涉对比显微镜(Differential interference contrast DIC)
    微分干涉对比镜检术出现于60年代,它不仅能观察无色透明的物体,而且图象呈现出浮雕壮的立体感,并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点,观察效果更为逼真。
    (1) 原理
    微分干涉对比镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等,光束分别在距离很近的两点上通过被检物体,在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小,而不出现重影现象,使图象呈现出立体的三维感觉。 
    (2) 微分干涉对比镜检术所需的特殊部件:
    a. 起偏镜
    b. 检偏镜
    c. 渥拉斯顿棱镜2 块
    (3) 微分干涉对比镜检时的注意事项
    a. 因微分干涉灵敏度高,制片表面不能有污物和灰尘。
    b. 具有双折射性的物质,不能达到微分干涉对比镜检的效果。
    c. 倒置显微镜应用微分干涉时,不能用塑料培养皿。
    7. 倒置显微镜(Inverted microscope)
    倒置显微镜是为了适应生物学、医学等领域中的组织培养、细胞离体培养、浮游生物、环境保护、食品检验等显微观察。
    由于上述样品特点的限制,被检物体均放置在培养皿(或培养瓶)中,这样就要求倒置显微镜的物镜和聚光镜的工作距离很长,能直接对培养皿中的被检物体进行显微观察和研究。因此,物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来,故称为"倒置显微镜"。
    由于工作距离的限制,倒置显微镜物镜的最大放大率为60X。一般研究用倒置显微镜都配置有4X、10X、20X、及40X 相差物镜,因为倒置显微镜多用于无色透明的活体观察。如果用户有特殊需要,也可以选配其它附件,用来完成微分干涉、荧光及简易偏光等观察。 
    目见倒置显微镜广泛应用于patch-clamp ,transgene ICSI 等领域。
    8. 数码显微镜
    数码显微镜是以摄像头(即电视摄像靶或电荷耦合器)作为接收元件的显微镜。在显微镜的实像面处装入摄像头取代人眼作为接收器,通过这种光电器件把光学图像转换成电信号的图像,然后对之进行尺寸检测、颗粒计数等工作。这类显微镜可以与计算机联用,这便于实现检测和信息处理的自动化,多应用于需要进行大量繁琐检测工作的场合。

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