6、 不含谷氨酰胺的RPMI-1640
7、 固定剂：细胞在体外刺激后需要对细胞进行固定。固定的目的在于通过蛋白的交联和变性一方面使细胞因子固定在细胞内，另一方面避免细胞表面抗原丢失。含4%的多聚甲醛PBS溶液（eBioscience，目录号00-8222）
8、 破膜剂：含1％皂甙、0.05％叠氮化钠的Hanks溶液（HBBS）（eBioscience，目录号00-8333）
将细胞膜穿孔，已利于荧光标记的细胞因子抗体进入细胞内，于相应的细胞因子结合
9、其它试剂：无菌无叠氮钠PBS，乙醇，含1%多聚甲醛的PBS，4℃储存。
五、细胞培养和刺激的基本方法
细胞活化的最终结果是产生细胞因子，根据检测指标和标本的不同，研究人员需要选择不同的刺激剂和刺激时间，以获得最佳的实验结果。下表提供了检测一些常用细胞因子的推荐的活化方法。
表1、细胞内细胞因子流式检测推荐的阳性对照活化方法
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检测细胞因子 |
阳性对照刺激方法 |
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人IFN-g |
方法2 (4-24 小时) |
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人TIMP-1 |
方法5 |
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人TNF- |
方法7 (6 小时) |
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人IL-1a |
方法3 (6 小时) |
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人IL-1 |
方法3 (24 小时) |
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人IL-2 |
方法2 (4-24 小时) |
人IL-4 |
方法4 |
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人IL-5 |
方法1 |
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人IL-6 |
单核细胞：方法3 (6-12 小时) T细胞：方法6 |
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人IL-10 |
方法1 |
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人IL-12 |
方法8 |
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人IL-15 |
方法3 |
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人Fractalkine/CX3CL1 |
方法1 |
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人IL-8/CXCL8 |
方法3 (24 小时) |
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人MCP-1/CCL2 |
方法3 (24 小时) |
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人MIP-1a/CCL3 |
方法3 (24 小时) |
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人MIP-1b/CCL4 |
方法3 (24 小时) |
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人RANTES/CCL5 |
方法1 |
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小鼠IL-2 |
方法9 |
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小鼠IL-4 |
方法10 |
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小鼠IL-5 |
方法10 |
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小鼠IL-6 |
方法11 |
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小鼠IFN |
方法9 or 方法12 |
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小鼠TNF- |
方法9 |
