生命科学实验中心
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◇ DNA序列测定技术
序列测定的技术和策略Sanger双脱氧链终止法Maxam-Gilbert DNA化学降解法测序策略 目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等(1977)……
◇ DNA序列测定技术:Sanger双脱氧链终止法
Sanger法DNA测序的试剂 现行的逻终止法人加减法序列测定技术(Sacger和Coulson,1975)发展而来的。加减法首次引入了使用特异引物在DNA聚……
◇ DNA序列分析(Sanger酶法)
一、试剂 1 、 10 × TBE ( pH 8.3 ): 2&nb……
◇ 质粒DNA的制备
一、原理: 含质粒细菌悬于等渗溶液中,EDTA破坏细胞外膜,去污剂SDS溶解球形体,使质粒从细菌内部释放出来;通过碱处理(PH 12 NaO……
◇ 细胞基因组DNA制备
实验原理:在去污剂SDS及EDTA存在下,通过蛋白酶K消化细胞蛋白质,RNA酶消化RNA获得细胞基因组DNA。本方法获得的DNA可用于Southern杂交及构建……
◇ 外源DNA和质粒载体的连接反应
外源DNA片段和线状质粒载体的连接,也就是在双链DNA5磷酸和相邻的3羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5磷酸,可生成4个新的磷酸二酯链。但如果……
◇ 基因多态性的检测方法
多态性(polymorphism)是指处于随机婚配的群体中,同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中,个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因(DNA)的……
◇ DNA点杂交
DNA斑点印迹的制备 预备1.冰浴中以70W左右的超声波处理基因组DNA 1min,用琼脂糖凝胶电泳检测片段大小,这些片段大小均应为7~10kb。2.用TE缓冲……
◇ 放射性同位素标记的DNA序列测定分析
放射性同位素标记的DNA序列测定分析 测定DNA的核苷酸序列是分析基因结构与功能关系的前提。从小片段重叠法到加减法、双脱氧链终止法、化……
◇ 质粒提取
一、导论 已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA, 这些方法都含有以下3个步骤:(一)细菌培养物的生长 从琼脂平板上挑取一……
