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小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2008-9-17

    实验目的
              掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程,了解操作步骤的原理

    实验原理
                 小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,可以进行染色体组型分析。

    实验原理
      制备方法包括以下几个要点: 
    1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成,使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处
    2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上
    3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象 

    实验用品
    1.材料:小白鼠
    2.器具:注射器(1ml,5ml) 剪刀 镊子  玻璃吸管  10ml刻度的离心管  离心机  载玻片 盖玻片 显微镜   滤纸  擦镜纸  纱布  恒温水浴锅
    3.药品:0.01%秋水仙素  0.075MKCl  固定液(甲醇:冰醋酸=3:1) 2%柠檬酸钠  改良石炭酸品红

    实验步骤
    预处理→取股骨→冲洗骨髓→离心→低渗→离心→固定→离心→滴片→染色→观察      

    1.预处理:实验前2.5-3小时,按每克体重注射0.02ml,给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
    2.取股骨:断颈处死小鼠后,剔去肌肉组织,洗净
    3.冲洗骨髓:剪去两端的股骨头,吸取 10ml 2%柠檬酸钠,注射 器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨,洗液收集到10ml的离心管中
    4 .离心: 1000r/min 离心10 min ,弃上清
    5 .低渗:加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ,中间(约15 min )再吹散一次,使细胞分散,悬浮于溶液中
    6.离心:1000r/min离心10 min,弃上清
    7.固定:沉淀加8ml固定液,并用吸管轻 轻吹匀,进行固定,中间(约15 min )再吹散一次
    实验步骤
    8.  离心: 1000r/min 离心10 min ,留1 ml  左右上清,轻轻吹打成细胞悬液
    9.  滴片:用吸管吸取细胞悬液,高度30-40 cm,滴在预冷的载玻片上,在酒精灯火焰上微微加热,室温晾干
    10. 染色:改良石炭酸品红染色10-20 min
    11. 观察:低倍———高倍

     

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