尽量减少RNAase污染
-RNase的危害主要集中在将RNA pellet溶解在水中之后，防止RNA降解的重点应当放在组织样本的保存和RNA水溶液的保存上。
-注意实验前的准备工作：各种器材的去RNAase处理与无RNAase的准备。
-长期保存RNA时建议用去离子甲酰胺溶解总RNA沉淀
如何确认RNA的质量
-RNA的电泳图谱
-检测RNA溶液的吸光度
-保温试验
-荧光染色、毛细管电泳和Agilent2100生物分析仪分析
RT引物的选用
-GSP：适合序列肯定的模板，常用于一步法RT－PCR。但是引物设计质量影响RT的结果。在扩增低丰度的转录本时是最好的。
-Oligo dT引物:真核生物的mRNA适用，建议用于高质量RNA及全长转录本的逆转录；
-随机引物：适合各种RNA的RT，可用于mRNA片段的逆转录。
RT中提高合成全长cDNA的效率
-消除mRNA 二级结构：逆转录之前将RT引物与RNA 模板进行短暂的热变性, 可破坏mRNA 二级结构, 促进锚定引物与模板的正确配对。
-选用RNase H灭活改造的新型耐高温逆转录酶： Thermoscript、Superscript Ⅲ等，RT后建议进行RNase H消化处理。
-锚定RT引物的选用：5'–(T)25V N–3‘
-热启动RT
-有条件者选用Tricine-EDTA Buffer溶解cDNA
10 mM Tricine-KOH (pH 8.5)
1.0 mM EDTA
高保真DNA 多聚酶的选用
-常用高保真DNA 多聚酶：如Pfu、Deep Vent、Vent、Pwo、KOD、Pyrobest、PrimerStar等
-PCR过程中HotStart与Touchdown的使用
-高保真DNA 多聚酶与普通rTaq的混合使用
-PCR产物加A尾进行T-A克隆：循环即将结束时加入rTaq 5U 72 ℃保温20～30 min
-两步变温法PCR
