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已知基因序列的获取策略——兼谈引物设计与序列分析
作者:黄 钢… 来源:第三军医大学遗传教研室 时间:2008-6-1

    一、如何获取已知目的基因的序列信息
    先查找其蛋白相关信息,了解该基因编码产物的基本情况与功能(www.expasy.org
    进一步查找其核酸相关序列信息,常用数据库:Genebank、EBI、DDBJ

    二、目的基因cDNA序列的获取方法
    cDNA文库扫描
    RT-PCR
    人工合成

    组织RNA的提取
    -在匀浆器中加工冷冻的组织
    -通过注射器加工冷冻的组织
    -在液氮中将组织研磨成粉末
    -在液氮中研磨组织至粉末状,细胞裂解更完全,产量比前二者多一倍。
    -合适的RNA提取方法加上合适的组织处理方法,才能够获得最佳的提取效果

    RNA提取两要素
    忌讳贪多:不能指望1ml Trizol 提取100mg以上组织,一般50mg用1mlTrizol较合适
    速战速决:尽量缩短提取时间,不要完全照搬Protocol,比如匀浆后如果没有很多组织碎片的话,可以立即加入氯仿,立即离心,14000rpm离心10min,取完上清加入0.6~1体积的异丙醇,立即高速离心(14,000rpm,5min),..... 总之尽量快速!

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