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抗体的制备及应用
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2008-5-30

    购买抗体时要注意厂商的标注
    适合于做什么实验,使用浓度多少
    WB(Western blotting ,免疫印迹)
    IH (Immunohistochemistry, 免疫组织化学)
    IC (Immunocytochemistry, 免疫细胞化学)
    IEM (Immune lectron microscopy,免疫电镜)
    FCM (Flow Cytometry,流式细胞仪)
    ELISA(enzyme linked immunosorbent assey,酶联免疫吸附实验,酶联免疫分析)

    2、多克隆抗体的特点
       多抗是单抗的混合物,因此多抗的性质是一个群体综合的性质。
    特异性一般比单抗差
       因为由不同性质的抗体组成,只要其中含交叉反应的抗体,多抗就有交叉反应,所以多抗更容易有交叉反应。

    比单抗更容易捕捉抗原。因为含有抗不同表位的抗体,多种抗体都可与抗原结合。
    抗体的纯化、标记比单抗难因为含有各种不同类型、亚类的抗体,提纯、标记的方法有所差别。同时,血清中含有的杂蛋白比较多

    二、抗体的制备
    1、单克隆抗体的制备
    无法采用生物化学的方法从多抗中分离必须采用细胞杂交的方法来制备能否筛选到理想的单克隆抗体有技术问题也有机遇问题
     
    制备单克隆抗体的基本原理:

    2、多抗的制备
    常用的免疫动物
    免疫的基本步骤
    如何免疫兔子

    1)常用的免疫动物
    兔子(rabbit):最常用于自制抗体,抗体量较多。(新西兰,大耳白)
    小鼠(mouse):可用于自制抗体,但抗体量很少。(BALB/C,昆明鼠)
    大鼠(rat):可用于自制抗体,免疫过 程要麻醉动物。(Wistar大鼠)
    羊(sheep、goat):常用于较大批量地 生产抗体(商品)。
    马(horse):常用于大批量生产治疗用抗体(商品)。
    豚鼠(guinea pig):国外实验室常用。

    2)免疫的基本步骤
    基础免疫:首次,抗原用量大,用佛式完全佐剂(Complate Freund’ adjuvand ,含矿物油,卡介苗等).
    加强免疫:第2次以后,抗原量减半,多次, 间隔2-4周,用佛式不完全佐剂 (Incomplate Freund’ adjuvand , 不含卡介苗).

    取血测效价:加强免疫两次或三次以后的第7天取血。
    放血制备血清:最后一次免疫后7-10天放血。 (在三角瓶中加一些生理盐水,放血放置一段时间,凝固,吸取血清,离心,分装,冻存)

    3) 如何免疫兔子
    2000g(雌雄均可),健康,无病原(小鼠20g,大鼠200g)
    基础免疫
    0.5ml抗原(含0.25~0.5mg蛋白或108颗粒抗原)
    0.5ml佛式完全佐剂(CFA)(小鼠0.2ml)
    制备抗原-佐剂乳化液
    背部、颈部皮下多点注射或腿部肌肉注射(注意:不要剪毛)

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