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蛋白质电泳-在蛋白质组学中的应用
作者:罗元明 来源:中科院微生物所 时间:2008-5-28

    一维电泳在蛋白质组研究中的应用举例
    我们将一维电泳和LC-Ms/MS结合,成功进行如下研究:
       (1)血浆蛋白质组研究
       (2)SARS病毒蛋白的分析鉴定,成功鉴定了SARS病毒的S蛋白、N蛋白和E蛋白,有力推动了我国第一个SARS疫苗的研究和申报工作。

    双向电泳(2DE)
    原理:2DE就是第一向采用等电聚焦分离,第二向为SDS-PAGE分离。由于2DE是依据蛋白质的两种不同性质,即等电点和分子量进行分析,因此分辨率远高于其他任何一种单一的电泳方法,是目前分析混合蛋白质样品最有效的手段。(注意:双向电泳中的“双向”指的是按照蛋白质的两个性质即“等电点和分子量”进行分离的原理。)

    2DE仪器系统

    2DE在蛋白质组学方案中所处的位置
    这就是将2DE和质谱相结合进行比较蛋白质组分析的实验方案。(方案完后),下面,我将汇报用以上介绍的方法进行脾淋巴细胞及乳腺癌比较蛋白质组学的实验结果。

    双向电泳的操作程序(以进行差别表达蛋白组分析为例)
    1. 样品制备
    2. IPG strips重泡胀及上样(rehydration and liading)
    3. 等电聚焦
    4. 胶条平衡,包括还原和烷基化
    5. 第一向胶条转移到第二向
    6. SDS-PAGE
    7. 染色
    8. 图像分析

    目前,普遍采用预制的固定pH梯度胶条(immobilized pH gradient strips, IPG strips)。商品化的IPG strips可以从Amersham Pharmacia公司或BioRad公司购买。

    IPG胶条制备(casting of IPG strips)
    IPG slab gels with linear gradients pH 4-7, 4-9, 6-10 and 4-12 are cast according to Görg et al. (1986) with the recipes of Righetti (1990) and Görg et al. (1998).
    Two starter solutions (an acidic one and a basic one) are prepared as described in Table 1. For better polymerization, the acidic and basic solutions are adjusted to pH 7 with sodium hydroxide and acetic acid, respectively.

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