【注意的问题】
1．采血时不要加入太多的肝素，因为肝素含量过多时往往抑制淋巴细胞的转化。
2．培养过程中培养液逐渐变黄色，说明pH发生了较大变化，将不利于细胞生长，此时可加入适量灭菌的1.4% NaHCO3溶液调整，或再加入2～3ml培养液的办法来校正。
3．培养失败的原因，一般有下述几种：①培养瓶及器材洗涤不符合要求；②配制溶液的双蒸水不符合要求；③PHA和培养液的质量有问题，或培养液pH不符合要求；④无菌操作不符合要求，发生污染；⑤淋巴细胞对PHA反应降低，致分裂相太少。
4．标本质量不佳的原因：①秋水仙素的处理不当，如秋水仙素的浓度不够或处理时间不足，结果分裂相太少；如浓度过高或处理时间过长，则使染色体过于缩短，难于进行分析；②低渗处理不当，低渗处理时间过长时，细胞膜往往过早破裂，染色体丢失；如果低渗处理不够，则染色体分散不佳，难以进行计数分析；③离心速度不合适，收集细胞时离心的速度太低易丢失细胞，如果低渗后离心速度过高，往往使分裂相过早破裂，完整的分裂相减少；④标本固定不充分，如固定液不新鲜，或甲醇、冰醋酸的质量不佳，结果染色体模糊，或残留胞浆痕迹，使背景不清；⑤玻片去污不彻底，冷冻不够，使细胞悬液不能均匀附着以致细胞大量丢失，或染色体分散不佳。
5．制备G显带染色体标本时，要严格控制胰酶消化时间，时间不足显不出带纹，时间过长，使染色体不规则或形成空泡状。
附 录
一、试剂及配制：
1、 RPMI1640培养液
RPMI1640 10.4g
肝素 80mg
PHA 182mg
胎牛血清 100ml
抗菌素 8万单位
NaHCO3 2g
双蒸水定容至1000ml。
抽滤除菌，分装，-200C保存待用。
2、 低渗液（0.075Mol KCl）
KCl 2.794 g
三蒸水 500ml
3、 固定液
甲醇（AR）：冰醋酸（AR）=3：1 现用现配。
4、 Giemsa染液
贮存液
Giemsa 5g
纯甘油（AR） 330ml
甲醇 （AR） 33ml
先将Giemsa粉剂溶于少量的甘油中，在研钵中充分研磨至无颗粒粘糊状，再将全部甘油加入，然后移至烧杯中，在55～60OC温箱中放置2小时，冷却后加入甲醇，充分搅拌均匀，在室温放置2～3周后过滤除去絮状物，储存在棕色瓶中，一般放置3周后使用效果更好。
使用液
磷酸缓冲液甲、乙各2.5ml，加45ml双蒸水，加Giemsa原液2.5ml。
5、 2.5%胰蛋白酶原液
胰蛋白酶粉剂 2.5g
生理盐水 100ml
6、 秋水仙素（10mg/ml，使用液100μg/ml）
秋水仙素 1g
生理盐水 100ml 抽滤，4OC棕色瓶保存。
7、 肝素（2500U/ml，使用浓度50U/ml）
肝素钠 312.5 mg
生理盐水 100ml 高压灭菌。
8、 Hanks液（g/L）
NaCl 8.00
KCl 0.40
CaCl2 0.14
MgSO4•7H2O 0.20
Na2HPO4 0.06
KH2PO4 0.06
NaHCO3 0.35
葡萄糖 1.00
酚红 0.02
