2．仪器
（1）天平
（2）组织捣碎机
（3）容量瓶（50mL）
（4）刻度吸管（5mL，10mL）
（5）锥形瓶（100mL）
（6）碱式滴定管（10mL）
3．试剂
（1）2％草酸
（2）1％草酸
（3）标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）：精确称取50.0mg 抗坏血酸，用1％草酸溶液溶解并定容至500mL。临用现配。
（4）0.05％的2,6-二氯酚靛酚溶液：500mg 2,6-二氯酚靛酚溶于300mL 含104mg 碳酸氢钠（A.R）的热水中，冷却后再用蒸馏水稀释至1 000mL，滤去不溶物，贮棕色瓶内，4℃保存一周有效。滴定样品前用标准抗坏血酸标定。
四、操作步骤
1．2,6-二氯酚靛酚溶液的标定：准确吸取4.0mL 抗坏血酸标准液（含0.4mg 抗坏血酸）于100mL 锥形瓶中，加16mL 1％草酸溶液，用2,6-二氯酚靛酚滴至淡红色（15S 内不褪色即为终点）。记录所用染料溶液的体积（mL），计算出1mL 染料溶液所能氧化抗坏血酸的量（mg）（记作T）。
2．样品滴定：准确吸取样品提取液（上清液或滤液）两份，每份20.0mL，分别放入两个100mL 锥形瓶中，按上面的操作进行滴定并记录所用染料溶液体（mL）。
五、结果计算
取两份样品滴定所用染料体积平均值，代入下式计算100g 样品中还原型抗坏血酸的含量：
式中：V —— 滴定样品提取液消耗染料平均值（mL）
T —— 每mL 染料所能氧化抗坏血酸mg 数
G —— 匀浆总重量（g）
G1 —— 制备提取液取用匀浆重量（g）
A —— 样品提取液定容体积（mL）
A1 —— 滴定时吸取样品提取液体积（mL）
W —— 样品重量（g）
六、附 注
（1）样品提取液定容时若泡沫过多，可加几滴辛醇或丁醇消泡。
（2）市售2,6-二氯酚靛酚质量不一，以标定0.4mg 抗坏血酸消耗2mL 左右的染料为宜，可根据标定结果调整染料溶液浓度。
（3）样品的提取液制备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免抗坏血酸被破坏。
（4）滴定过程宜迅速，一般不超过2min。样品滴定消耗染料1～4mL 为宜，如果超出此范围，应增加或减少样品提取液用量。像番茄、柑桔等维生素C 含量高的试材，可称取5g 样品，加少许2%草酸研磨，定容到50mL，再离心或过滤；吸取20mL 两份，分别滴定，记录消耗的染料量。按下式计算维生素C 含量。
式中：V 滴定样品提取液消耗染料平均值（mL）
T 每mL 染料所能氧化抗坏血酸mg 数
A 样品提取液定容体积（50mL）
A1 滴定时吸取样品提取液体积（20mL）
W 样品重量（5g）
七、思考题
1． 该法测定抗坏血酸有何不足？
2． 用2%草酸提取样品的目的是什么？
参考答案
1．用本法测定抗坏血酸含量虽简便易行，可以一次测定大量的样品。但有下述缺点：第一，本法只能测定还原型抗坏血酸，不能测出具有同样生理功能的氧化型抗坏血酸和结合型抗坏血酸。第二，样品中的色素经常干扰对终点的判断，可预先用白陶土脱色，或加入2～3ml 二氯乙烷，以二氯乙烷层变红为终点。
2．用2％草酸制备样品提取液，可有效地抑制抗坏血酸氧化酶，以免抗坏血酸为氧化型而无法滴定。如果样品中有较多亚铁离子（Fe2＋）时，亦会使染料还原而影响测定，这时应改为8％乙酸制备样品提取液。
