【原理】
ELISA双抗体夹心法（enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique）的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。以检测HbsAg为例。

【材料】
酶标抗体（HRP-抗HBs-IgG）、抗HBs-IgG、待检血清
包被液  pH9.5  0.05 mol/L CB
稀释液  pH7.4  0.02 mol/L Tris-HCl缓冲液
底物液  0.1 mol/L Na₂HPO₄（Na₂HPO₄·12H₂O 35.8 g/L）5.14 ml，0.05 mol/L枸橼酸（10.5g/L）4.86 ml混匀，加入邻苯二胺（OPD）4 mg，置棕色小瓶中，临用时加30% H₂O₂ 4.0μl，混匀。
终止液  2 mol/L H₂SO₄
温箱、酶标反应板、酶标分光光度计

【方法】
1．  包被 取包被液适当稀释的抗HBS-Ig 0.1 ml，加到聚苯乙烯反应板各孔中。加盖，4℃ 24h。次日用洗涤液充分洗涤3次，甩干。
2．  各孔内加不同稀释倍数的待检血清0.1 ml，同时加阳性和阴性对照血清，置43℃温箱60 min，移去液体。同前法洗涤3次，甩干。
3．  各孔内加稀释HRP-抗HBs-IgG 0.1 ml，置43℃温箱60 min。移去液体，同前法洗3次，甩干。
4．  各孔加底物液0.1 ml，置黑暗处20 min。
5．  各孔内加2 mol/L H₂SO₄ 0.05 ml，终止反应。

【结果】
1．  目测法  阳性孔呈桔黄色，阴性孔无色或极浅黄色。
2．  比色法  用酶标分光光度计测A492nm，计算P/N值（为待测血清A492nm和阴性对照A492nm的比值）。如P/N2.1，结果为阳性，否则为阴性。
ELISA简便、敏感、特异。并酶标记抗体试剂制备容易、稳定、有效期长、因此推广很快，ELISA双抗体夹心法，但仅适用于二价或二价以上的大分子抗原的检测。