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水稻萌发及幼苗期淀粉酶和过氧化氢酶活性测定
作者:未知 来源:湖南农业大学植物科学实验教学中心 时间:2008-5-20

    五、注意事项
    (1)实验前应将所用研钵、试管、容量瓶等玻璃器皿冲洗干净,并注意移液管的分别使用,以避免酶遇强碱失活。
    (2)注意控制好酶反应温度及pH值。

    Ⅱ 植物组织中过氧化氢酶活性的测定
    一、原理
    过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和氧。在过氧化氢酶液中加入一定量的过氧化氢,反应一定时间后,终止酶的活性,剩余的过氧化氢,以钼酸铵作催化剂,与碘化钾反应,游离出的I2用淀粉作指示剂,用硫代硫酸钠溶液滴定到蓝色消失为止,反应如下:

    根据空白和测定二者之差,即可求出被酶分解的H2O2量,以每分钟过氧化氢酶分解底物H2O2的毫克数表示酶活性的大小。

    二、实验材料、仪器及试剂
    1.仪器:
    三角瓶(100ml) 容量瓶(100ml) 滴定点 蝴蝶夹酸式滴定管 恒温水箱 研钵 移液管
    2.试剂:
    (1)碳酸钙(固体) (2)0.1mol/L Na2S2O4 (3)16%H2SO4
    (4)10%钼酸铵 (5)1%淀粉 (6)20%KI
    (7)0.05mol/L H2O2
    3.实验材料:白菜叶、水稻幼苗
    三、实验方法
    (1)酶液制备:取白菜叶2g,剪碎。加2ml蒸馏水和少许CaCO3粉末,研磨成匀浆,转入100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀,静止片刻后过滤,取滤液10ml,再定容到100ml,摇匀备用。
    (2)酶促反应:取100ml三角瓶,编号,按下表顺序加入各液:

    (3)滴定:向各瓶中加入1m120%KI溶液和3滴钼酸铵,均匀,用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定,待溶液呈淡黄色时,再加5滴淀粉指示剂,此时溶液呈深蓝色,继续滴定到蓝色消失为止,记录消耗的硫代硫酸钠体积。
    四、结果计算

    M——硫代硫酸钠摩尔数;34.34——每毫克分子过氧化氢毫克数
    五、注意事项
    实验前应将所用三角瓶、容量瓶、研钵等玻璃器皿冲洗干净,并注意移液管的分析使用,以避免酶遇强酸失活。

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