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水稻种子中蛋白质和淀粉含量的测定
作者:未知 来源:湖南农业大学植物科学实验教学中心 时间:2008-5-20

    二、实验材料、仪器及试剂
    1.材料:稻米粉;
    2.仪器:100ml烧杯 50ml容量瓶 研钵 玻棒 漏斗 旋光仪
    3.试剂:① 1mol/L盐酸 ② 4%磷钨酸
    三、实验方法
    准确称取2g稻米淀粉样品,放入研钵,先磨成粉末状,然后加3ml 1mol/LHCL溶液研磨成匀浆,再加5ml 1mol/L HCL研磨,将溶液转入50ml容量瓶中。用20ml蒸馏水分次冲洗研钵,洗液一并倒入容量瓶中,摇匀后,放入沸水浴中煮沸,间隔摇动(其间打开容量瓶塞子)。加热15分钟后,稍冷却,加5ml 4%磷钨酸,并用蒸馏水定容至刻度,混匀。静置5分钟,将溶液过滤到一干净烧杯中,此时滤液应澄清透亮。将滤液装入2分米长旋光管,测定其旋光偏振角α值。
    四、结果计算:

    式中,α—用钠光时观测到的旋光度
     —淀粉的比旋光度
    L—旋光管长度(分米)
    W—样品重量(克)
    N—样品液总体积
    ×100—换算为百分率
    也可以不用上列公式计算,改用工作曲线求得淀粉含量,这样准确度高些。

    五、附注:
    1.比旋光度[α]是指偏振光经过1分米厚、浓度为1克/毫升的旋光性物质所旋转的角度:

    式中,[α]指比旋光度,D指钠D线,20指温度。
    2.WXG-4小型旋光仪使用方法:
    (1)先将仪器接于220伏交流电源,开启电源开关,约五分钟后,钠光灯发光正常,就可开始工作。
    (2)检查仪器零位:在仪器未放旋光管或者放进充满蒸馏水的旋光管时,观察刻度盘指到零度时视野亮度是否一致,如下图(3)所示,但绝不是(4)。

    如不一致 [ 如上图(1)、(2)所示 ],说明有零位误差,应在测量读数中减去或加上该偏差值。或放松刻度盘背面四只螺钉,微微转动刻度盘校正之
    (只能校正0.50左右的误差,严重的应送制造厂检修)。
    (3)选取长度适当的旋光管,先用少量待测液将管内壁洗净后,注满待测溶液,装上橡皮垫圈,旋上螺帽,直至不漏水为止,在管内光线通道上,不应留有气泡。螺帽不要旋得太紧,否则护片玻璃会引起应力,影响读数的正解性。然后将旋光管两端的残余溶液揩干,以免影响观察清晰度和测定的精度。将旋光管放进仪器的管槽内。
    (4)测定旋光度读数:转动刻度盘以带动检偏镜旋转,在视野中觅得亮度一致的位置[如图(3)所示],再从刻度盘上读数。读数成正的为右旋物质,读数为负的系左旋物质。
    (5)本仪器采用双游标读数法,可按下列公式求得结果:

    式中A和B分别为两游标窗读数值
    如A = B,且刻度盘转到任意位置都符合等式,则说明仪器没有偏心差
    (一般出厂前仪器均作过校正),可以不用对顶读数法。
    (6)连续读数四、五次,计算其平均值。
    (7)旋光度与温度有关,应尽量在20°±2℃的条件下观测(将恒温的水通入旋光仪夹套内,以保持旋光管内液体为2℃)。当温度升高1℃,旋光度约减少0.3%,可据此加以校正。
    (8)观测完毕,将旋光管溶液倒出,洗净晾干后收藏。仪器如长时间不用,应即关闭电源开关。
    3.自动旋光仪的使用方法:
    (1) 接通电源,开机预热使光源稳定;
    (2) 将清洗干净的旋光管装满蒸馏水进行校零;
    (3) 将样品装入旋光管进行测定;
    (4) 读数指示灯亮起后读数记录。
    六、注意事项
    (1)用磷钨酸沉淀蛋白质等有旋光性的物质时,一定要保证静置时间,否则溶液混浊,无法进行旋光度的测定。
    (2)注意旋光管及其盖上的玻片不要损坏或丢失。

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