第五讲 胶体金技术
胶体金技术是七十年代推出的一门检测技术，广泛应用于生物学和医学等领域，目前已成为一种最常用的快速的检测技术。
一、基本原理及类型
该技术以微孔膜作为固相，固相膜有很多孔，像滤纸一样，常用的固相膜为硝酸纤维素膜，液体可以穿过流出，也可以通过毛细管作用在膜上向前移动。利用这两种性能建立了两种不同类型的快速检测方法，前者叫免疫渗滤试验，后者叫免疫层析试验，两者统称为“金标”。
胶体金也称金溶胶，是由金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。胶体金具有胶体性质、呈色性及光吸收性。因此肉眼观察结果是最简单、方便的检测方法。
二、免疫渗滤试验(IFA)
1、基本原理：以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可滤过性，使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上，以液体渗滤过膜的方式迅速完成。
2、试剂：
(1)渗滤装置：由塑料小盒，吸水垫和点加了抗原或抗体的硝酸纤维素（NC）膜片三部分组成。塑料小盒可以是多种形状的；盒盖的中央内有一直径约0.4-0.8cm的小圆孔，盒内垫放吸水垫料，NC膜片安放在正对盒盖的圆孔下，紧密关闭盒盖，使NC膜片贴紧吸水垫料。整个反应过程都在渗滤装置上进行。
(2)试剂盒组成：IFA试剂盒的3个基本试剂成分是反应板，结合物和洗涤液。为了提供质控保证，用于抗原测定的试剂盒还应包括抗原参照品，相应的检测抗体的试剂盒应有阴性对照品。以双抗体夹心法测HCG为例，在NC膜中央滴加抗β-HCG抗体，结合物为金标记的抗β-HCG抗体。
3、操作：
① 将反应板平放于实验台，于小孔内滴加标本1-2滴，待完全渗入。此时标本中的HCG与NC膜上的抗β-HCG相结合。
② 于小孔内滴加结合物试剂1-2滴，等完全渗入。金标记的抗β-HCG抗体与NC膜上的HCG形成双抗体夹心复合物。因胶体金为红色，在NC膜上出现红色斑点。
③ 于小孔内滴加洗涤液2-3滴，待完全渗入。
④ 判读结果：在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点显示者判阳性反应；反之，则为阴性反应。斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。
三、免疫层析试验(ICA )
ICA是继IFA之后发起来的另一种膜固相免疫测定。与IFA利用微孔膜的过滤性能不同，ICA中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般。移动过程中被分析物与固定于膜上某一区域的受体（抗原或抗体）结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过标记物的显色来判定实验结果。以胶体金为标记物的试验称为金免疫层析试验(GICA)。
1、试剂：ICA中所用的试剂全部为干试验，它们被组合在一试纸条上。试剂条的底板为一单面胶塑料片，A、B两端粘贴有吸水材料。加样端A为样品垫，可用的材料有滤纸，多孔聚乙烯和玻璃纤维等，按分析物和试剂的不同选择合适的。B端为吸水垫，材料则以吸水性强的滤纸为佳。G处为结合物垫，胶体金结合物干燥固定在玻璃纤维膜等材料上。G、B之间粘贴有吸附有受体的硝酸纤维素膜，受体（抗原或抗体）以直线形式包被在膜上。
2、操作：
以双抗体夹心法测HCG为例。试条中G处为金标记的抗β-HCG，NC膜上T处包被抗β-HCG，C处包被抗小鼠IgG抗体。测试时在A端加尿液（或将A端浸入尿液中），通过层析作用，尿液向B端移动，流经G区时将金标记抗α- HCG抗体复溶，若尿液中含HCG，即形成抗α-HCG-HCG复合物；
移动至T区，形成金标抗α-HCG- HCG-抗β-HCG复合物，在T区显示红色线条，为阳性反应，多余的金标记抗α-HCG移动至C区时被抗小鼠IgG抗体捕获，而显示出红色质控线条。如尿液中不含HCG，在T区不出现红色线条，仅在C区出现红色线条，试验结果为阴性，如C区无红色线条出现，表示试验无效。
四、临床应用
1、感染性疾病的抗原、抗体的检测：
可检测的抗原有HBsAg, HBeAg，疟原虫抗原、大肠埃希杆菌抗原等。可检测的抗体有：抗结核杆菌抗体，抗幽门螺杆菌抗体，抗HBs，抗HIV抗体，抗登革热抗体，梅毒抗体等。
2、各种蛋白质的检测：甲胎蛋白、癌胚抗原、肌红蛋白、肌钙蛋白、尿蛋白、粪便血红蛋白等。
3、激素的检测：HCG、LH、FSH、TSH，其中尿HCG的检测应用最广。
4、药物检测：主要检测毒品类，如吗啡，可卡因，鸦片等。
